[發(fā)明專利]MRSA中QacC基因的檢測引物及其檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210033096.2
• 申請日: 2012-02-14
• 公開（公告）號: CN102586432A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 傅詠南;張奕;王校
• 申請（專利權(quán)）人: 上海中優(yōu)醫(yī)藥高科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/14;C12N15/11
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

1.MRSA中QacC基因的檢測引物，其特征在于，包括：

(A).QacC基因正向引物：5’-tgcaacacctaccactaaatataactt-3’；

(B).QacC基因反向引物：5’-cgaaactacgccgactatga-3’。

2.一種MRSA中QacC基因的檢測方法，其特征在于，采用權(quán)利要求1所述的MRSA中QacC基因的檢測引物，具體步驟為：

第一步：取經(jīng)培養(yǎng)后鑒定為MRSA陽性的臨床樣本分離株，高溫滅活，提取樣本DNA，作為檢測樣品；取不攜帶QacC基因的金黃色葡萄球菌菌株，高溫滅活，提取樣本DNA，作為陰性對照品；人工合成QacC序列，構(gòu)建攜帶QacC基因的重組質(zhì)粒為陽性對照品；

第二步：用無菌水分別配制濃度為5-15umol/L的QacC基因正向引物溶液、濃度為5-15umol/L的QacC基因反向引物溶液及濃度為5-15umol/L的QacC基因檢測探針溶液；QacC基因正向引物的序列為：5’-tgcaacacctaccactaaatataactt-3’，QacC基因反向引物的序列為：5’-cgaaactacgccgactatga-3’，QacC??基因檢測探針的序列為：FAM-gcaacttgggcggga-MGBNFQ；

第三步：在每一個PCR反應(yīng)孔中依次加入PCR?Master?Mix?10-15ul和第二步得到的QacC基因正向引物溶液0.1-1ul、QacC基因反向引物溶液0.1-1ul、QacC基因檢測探針溶液0.1-1ul，然后在不同的PCR反應(yīng)孔中分別加入第一步得到的檢測樣品、陰性對照品及陽性對照品各0.1-1ul，用滅菌重蒸餾水補(bǔ)足25ul；在熒光定量PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)條件為40-60℃保溫1-3分鐘，80-100℃保溫1-3分鐘，然后運(yùn)行30-50個循環(huán)，每個循環(huán)包括在80-100℃保溫10-20秒，再在50-70℃保溫0.5-1.5分鐘；

第四步：用軟件SDS2.2進(jìn)行結(jié)果分析，PCR結(jié)果呈S形曲線即為攜帶QacC基因。