[發(fā)明專(zhuān)利]一種蛇傷快速鑒別的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210032755.0
• 申請(qǐng)日: 2012-02-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102590496A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高建芳;王金;屈彥福;馬小梅;計(jì)翔
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 高建芳;王金;屈彥福;馬小梅;計(jì)翔
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/543
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/543
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種蛇傷快速鑒別的方法，其特征步驟在于按如下步驟進(jìn)行：

(1)制備抗蛇毒免疫球蛋白(IgG)。選取所需鑒別的6種蛇毒(眼鏡蛇、銀環(huán)蛇、五步蛇、蝮蛇、竹葉青和烙鐵頭蛇毒)，皮下多點(diǎn)注射大鼠，制備6種多克隆抗蛇毒粗血清。粗血清先經(jīng)過(guò)硫酸銨沉淀去除非蛋白組分，再通過(guò)Hitrap?protein?IgG柱純化，獲得抗蛇毒IgG。

(2)篩選蛇毒物種特異性IgG。將蛇毒偶聯(lián)至活化的CNBr-activated?sepharose?4B親和介質(zhì)上，等量任取5種蛇毒偶聯(lián)后的濕潤(rùn)親和介質(zhì)共0.3g混合后裝入離心濃縮管內(nèi)管。室溫下，500μg的每種蛇毒的抗血清IgG分別與其余種蛇毒偶聯(lián)的親和介質(zhì)在水平搖床溫和地混勻2小時(shí)。隨后離心，用離心濃縮管外管收集未結(jié)合組分的洗出液，即為該種蛇毒區(qū)別于其它5種蛇毒的物種特異性IgG。

(3)蛇毒特異性IgG生物素化。特異性抗體和生物素重量比1∶5混合后，室溫震蕩結(jié)合2小時(shí)，隨后透析去除未結(jié)合生物素，得到生物素化特異性IgG。

(4)檢測(cè)酶標(biāo)條制作。以8孔酶標(biāo)條為載體，配有一個(gè)“T”形支架。酶標(biāo)條上設(shè)置6個(gè)樣品檢測(cè)孔，1個(gè)陽(yáng)性和1個(gè)陰性對(duì)照孔。各孔經(jīng)2％牛血清封閉，漂洗控干后在-20度保存。

(5)蛇傷快速鑒別。檢測(cè)時(shí)，采集蛇傷患者傷口部位流出液，滴加至各檢測(cè)孔，依次經(jīng)過(guò)生物素化特異性抗體、親和素化HRP的結(jié)合后，加入TMB顯色，根據(jù)檢測(cè)孔的陽(yáng)性或者陰性結(jié)果準(zhǔn)確判斷蛇傷類(lèi)型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛇傷快速鑒別的方法，其特征在于：所述步驟(4)中的8孔分別包被6種蛇毒特異性抗體混合液(1)、包被液(2)、銀環(huán)蛇毒特異性IgG(3)、眼鏡蛇毒特異性IgG(4)、五步蛇毒特異性IgG(5)、短尾蝮蛇特異性IgG(6)、竹葉青蛇毒特異性抗體(7)和烙鐵頭蛇毒特異性抗體(8)，每孔抗體量為200ng。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛇傷快速鑒別的方法，其特征在于：所述步驟(4)中在酶標(biāo)孔中包被6種蛇毒特異性抗體混合液為陽(yáng)性對(duì)照(6)，在酶標(biāo)孔中加入包被液為陰性對(duì)照(5)。