[發明專利]一種絞股藍次生皂苷及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201210030505.3
• 申請日: 2012-02-10
• 公開（公告）號: CN102603849A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 陳良華;童慶宣;明艷林;鄭志忠;鄭國華
• 申請（專利權）人: 廈門華僑亞熱帶植物引種園
• 主分類號: C07J17/00
• 分類號: C07J17/00;C12P33/20;A61P35/00;C12R1/66;C12R1/685
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種絞股藍，尤其是涉及一種絞股藍次生皂苷及其制備方法與應用。

背景技術

絞股藍(Gynostemma?pentaphyllum?Thnmb?Mak.)為葫蘆科絞股藍屬植物，絞股藍主要藥效成分為絞股藍皂甙(gypenoside，GYP)，其具有抑制腫瘤、防止衰老、降低血脂、增強免疫、保護心臟和肝臟、降低血糖、鎮靜止痛及抗潰瘍等藥理作用。絞股藍皂甙因具有與人參皂甙類似主骨架的達瑪烷型結構，有“南方人參”和“第二人參”的美譽。

近年來，通過對皂苷生理活性的藥效學和代謝動力學研究，人們注意到皂苷中的糖鏈與其生物活性之間有著密切的聯系。許多研究證實，糖鏈在皂苷的生物活性方面起到重要的作用，皂苷糖分子越少，其活性越高。國內外學者對人參皂苷單體與抗腫瘤活性的構效關系研究表明，低糖鏈的皂苷及苷元具有較強的抗腫瘤作用，其規律如下：原人參二醇型＞原人參三醇型；苷元＞單糖苷＞二糖苷＞三糖苷＞四糖苷，因此目前國際很多學者都致力于開發制備次生皂苷產品。次生皂苷的制備方法有酸堿水解法和生物轉化法，酸堿水解化學方法反應劇烈，副產物多，更多還是傾向于條件要求溫和的生物轉化法，尤其是微生物轉化法。

皂苷微生物轉化所用的微生物早期主要是腸道厭氧菌，而其他微生物的研究比較少。腸道厭氧菌發酵最初是以人排泄物中的總菌物進行發酵，后來研究篩選單一腸道菌來轉化，如采用腸道乳酸菌轉化人參二醇型皂苷制備CK，發現運用Bifidobacterium.minimum?KK-1和B.choerinum?KK-2共發酵轉化Rb1時效果最好，但腸道菌多為厭氧菌，培養條件苛刻，培養基成本高。另有研究篩選原始土壤微生物來降解人參皂苷，但酶解能力低下，目的產物收率不高，須通過優化發酵條件和菌種誘變等方法來提高轉化能力。

目前，皂苷微生物轉化研究較多的是天然人參皂苷和三七皂苷為前提物的微生物轉化制備次生皂苷，如中國專利CN101139562公開利用弗氏鏈霉菌菌株規模化發酵轉化各種三七皂苷、制備Compound?K提供一株性狀穩定、營養要求簡單、生長良好的鏈霉菌菌株，以及實用簡便的全自動發酵罐發酵、分離提取工藝。中國專利CN101928671A公開利用一種鏈格孢屬菌及其發酵人參莖葉總皂苷制備人參皂苷Rg3的方法，中國專利CN1793320A公開一株鐮刀霉菌及其用于制備人參皂苷Rh2的方法。根據文獻和專利檢索，尚未見利用微生物轉化法制備具有抗癌活性絞股藍次生皂苷專利報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種絞股藍次生皂苷及其制備方法。

本發明的另一目的在于提供絞股藍次生皂苷在制備抗癌活性劑中的應用。

所述絞股藍次生皂苷的化合物名稱為2α，3β，12β，20(S)-四羥基-24-達瑪烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷，結構式為：

分子式為C₄₂H₇₂O₁₄，分子量為800。

所述絞股藍次生皂苷為絞股藍皂苷與微生物共培養后的代謝產物。

所述絞股藍次生皂苷的制備方法包括以下步驟：

1)制備絞股藍皂苷：所述制備絞股藍皂苷的具體方法為將絞股藍粉末用乙醇溶液在水浴鍋中提取，將提取液真空濃縮獲得絞股藍乙醇提取物，再用乙醇溶液溶解后，上樣于大孔吸附樹脂柱，先用乙醇溶液沖洗后，再用乙醇溶液洗脫絞股藍皂苷，將洗脫液濃縮干燥，獲得絞股藍皂苷；

2)用微生物轉化絞股藍皂苷：所述用微生物轉化絞股藍皂苷的具體方法為將轉化培養基裝在250ml三角瓶中，裝液量50ml，在121℃，滅菌20min；取活化后的微生物轉入馬鈴薯液體培養基培養，培養至長出真菌孢子，按1％～5％接種量接入轉化瓶中，在25～37℃，180～300r/min搖床上培養12～72h后，加入2％～20％絞股藍皂苷底物進行轉化，在25～37℃，180～300r/min搖床上培養繼續培養1～5d后，收集轉化菌液；

3)制備絞股藍次生皂苷：微生物轉化絞股藍皂苷后，菌液過濾，取上清液，菌體再用水清洗，上清液上樣于大孔吸附樹脂，先用乙醇溶液沖洗后，用乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮干燥，獲得絞股藍次生皂苷。