[發明專利]一種絞股藍次生皂苷及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201210030505.3
• 申請日: 2012-02-10
• 公開（公告）號: CN102603849A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 陳良華;童慶宣;明艷林;鄭志忠;鄭國華
• 申請（專利權）人: 廈門華僑亞熱帶植物引種園
• 主分類號: C07J17/00
• 分類號: C07J17/00;C12P33/20;A61P35/00;C12R1/66;C12R1/685
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

1.一種絞股藍次生皂苷，其特征在于其化合物名稱為2α，3β，12β，20(S)-四羥基-24-達瑪烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷，結構式為：

分子式為C₄₂H₇₂O₁₄，分子量為800。

2.如權利要求1所述的一種絞股藍次生皂苷的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)制備絞股藍皂苷：所述制備絞股藍皂苷的具體方法為將絞股藍粉末用乙醇溶液在水浴鍋中提取，將提取液真空濃縮獲得絞股藍乙醇提取物，再用乙醇溶液溶解后，上樣于大孔吸附樹脂柱，先用乙醇溶液沖洗后，再用乙醇溶液洗脫絞股藍皂苷，將洗脫液濃縮干燥，獲得絞股藍皂苷；

2)用微生物轉化絞股藍皂苷：所述用微生物轉化絞股藍皂苷的具體方法為將轉化培養基裝在250ml三角瓶中，裝液量50ml，在121℃，滅菌20min；取活化后的微生物轉入馬鈴薯液體培養基培養，培養至長出真菌孢子，按1％～5％接種量接入轉化瓶中，在25～37℃，180～300r/min搖床上培養12～72h后，加入2％～20％絞股藍皂苷底物進行轉化，在25～37℃，180～300r/min搖床上培養繼續培養1～5d后，收集轉化菌液；

3)制備絞股藍次生皂苷：微生物轉化絞股藍皂苷后，菌液過濾，取上清液，菌體再用水清洗，上清液上樣于大孔吸附樹脂，先用乙醇溶液沖洗后，用乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮干燥，獲得絞股藍次生皂苷。

3.如權利要求2所述的一種絞股藍次生皂苷的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述將絞股藍粉末用乙醇溶液在水浴鍋中提取時，所述乙醇溶液的用量按質量比為絞股藍粉末的10～30倍。

4.如權利要求2所述的一種絞股藍次生皂苷的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述水浴鍋的溫度為60℃；所述提取提取2～4次，每次提取時間為24～72h。

5.如權利要求2所述的一種絞股藍次生皂苷的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述再用乙醇溶液溶解是用10％～30％乙醇溶液溶解；所述大孔吸附樹脂柱可采用HP20大孔吸附樹脂柱。

6.如權利要求2所述的一種絞股藍次生皂苷的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述先用乙醇溶液沖洗是用10％～30％乙醇溶液沖洗3～5個床體積；所述再用乙醇溶液洗脫絞股藍皂苷可用40％～80％乙醇溶液洗脫絞股藍皂苷。

7.如權利要求2所述的一種絞股藍次生皂苷的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述微生物采用曲霉屬真菌，所述曲霉屬真菌可選自黑曲霉、構巢曲霉、青霉、灰綠曲霉中的一種。

8.如權利要求2所述的一種絞股藍次生皂苷的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述轉化培養基的組成為：葡萄糖5～50g/L，蛋白胨1～5g/L，酵母膏1～5g/L，磷酸氫二鉀2～10g/L，氯化鈣2～8g/L，吐溫80(2～5)ml，七水硫酸鎂1～5g/L，四水硫酸錳1～5g/L。

9.如權利要求2所述的一種絞股藍次生皂苷的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述過濾是采用8層紗布過濾；所述清洗是清洗至少2次；所述大孔吸附樹脂可采用預處理好的HP20大孔吸附樹脂；所述先用乙醇溶液沖洗可用30％～50％乙醇溶液沖洗3～5個床體積；所述用乙醇溶液洗脫可用60％～100％乙醇溶液洗脫。

10.如權利要求1所述的一種絞股藍次生皂苷在制備抗癌活性劑中的應用。