[發明專利]從臭馬比木的嫩葉和嫩枝中提取喜樹堿和9-羥甲基喜樹堿的方法

無效

• 申請號: 201210030118.X
• 申請日: 2012-02-12
• 公開（公告）號: CN102603758A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 張苑金;張超;黃翀胤;李常青;張德坤;李悅山
• 申請（專利權）人: 張苑金
• 主分類號: C07D491/22
• 分類號: C07D491/22
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 李彥孚

1.一種從臭馬比木的嫩葉和嫩枝中提取喜樹堿的方法，其步驟包括：

預處理：選取新鮮的臭馬比木嫩葉和嫩枝，干燥后研磨成粉末；

發酵：按酶料比1.5：1(w/w)加入發酵液，發酵1~3天；發酵溫度為20~37℃，所述發酵液為安琪高糖干酵母或發利干酵母，其濃度為1~11‰(w/w)；

提取：在發酵產物中按0.5~3：1(w/w)的比例加入提取液，加熱提取；所述提取液為濃度為10~90%的乙醇溶液；所述加熱提取的溫度控制在40~75℃之間；

過濾：濾取上清液，即得提取液；

（5）、濃縮：在上述提取液中加入0.5~10%（W/V）的二氧化硫和硫酸亞鐵，濃縮，得濃縮物；

（6）、萃取：在濃縮物中加入萃取劑對濃縮物進行萃取，并回收萃取劑，得到萃取濃縮物，所述萃取劑為石油醚或二氯甲烷；

（7）、純化：在萃取濃縮物中加入10%~90%的丙酮溶液，先采用硅膠柱層析，初步結晶度達到70%左右；再進行低壓柱層柱，結晶純度達到80%左右；再采用FLASH中壓柱層析，收集洗脫液，其結晶純度達到95%左右；最后進行重結晶，得到純度為99%成品。

2.根據權利要求1所述的一種從臭馬比木的嫩葉和嫩枝中提取喜樹堿的方法，其步驟：（1）所述的發酵液為安琪高糖干酵母或發利干酵母，其濃度為1~11‰(w/w)。

3.根據權利要求1或2所述的一種從臭馬比木的嫩葉和嫩枝中提取喜樹堿的方法，其步驟（6）所述的萃取劑為石油醚或二氯甲烷。

4.根據權利要求1或2所述的一種從臭馬比木的嫩葉和嫩枝中提取喜樹堿的方法，其步驟（7）所述的重結晶是在洗脫液中按3：2：6的比例加入甲醇、丙酮、二甲基甲酰胺?(w/w)進行重結晶。

5.一種從臭馬比木的嫩葉和嫩枝中提取9-羥甲基喜樹堿的方法，其步驟包括：

（1）預處理：選取新鮮的臭馬比木嫩葉和嫩枝，干燥后研磨成粉末；

（2）發酵：按酶料比1.5：1加入發酵液，發酵1~3天；發酵溫度為20~37℃，所述發酵液為安琪高糖干酵母或發利干酵母，其濃度為1~11‰(w/w)；

（3）提取：在發酵產物中加入提取液，加熱提取；所述提取液為乙醇溶液，其濃度為：10~90%，所述加熱提取，溫度控制在40~75℃之間；

（4）濃縮：在上述提取液中加入0.5~10%的二氧化硫和硫酸亞鐵（抗氧化劑），濃縮，得濃縮浸膏；

（5）萃取：在濃縮物中加入萃取劑對濃縮物進行萃取，并回收萃取劑，得到萃取濃縮物，

所述萃取劑為石油醚或二氯甲烷；

（6）分離：在萃取濃縮物中加入丙酮溶液，攪拌均勻后靜置12~48小時，抽濾，保留濾液與濾餅；將濾餅用丙酮或乙酸乙酷或氯代甲烷溶解，攪伴后再次抽濾，回收濾液，兩次濾液混合，得到的濾液為含9-羥甲氫基喜樹堿的粗品；

（7）純化：將9-羥甲氫基喜樹堿的粗品進行柱層析，分段收集洗脫液進行HPLC檢測，純度大于98%的組分直接濃縮干燥，粉碎，得到成品；純度小于90%重復柱層析；純度在90%~98%間的加丙酮進行重結晶，直到9-羥甲氫基喜樹堿的純度大于等于98%，晶體干燥粉碎，得到成品。