[發(fā)明專利]從臭馬比木的嫩葉和嫩枝中提取喜樹堿和9-羥甲基喜樹堿的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210030118.X
• 申請(qǐng)日: 2012-02-12
• 公開（公告）號(hào): CN102603758A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張?jiān)方?/a>;張超;黃翀胤;李常青;張德坤;李悅山
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 張?jiān)方?/a>
• 主分類號(hào): C07D491/22
• 分類號(hào): C07D491/22
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 李彥孚

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物提取領(lǐng)域，尤其是一種采用萃取技術(shù)從天然藥用植物臭馬比木的嫩葉和嫩枝中提取喜樹堿和9-羥甲基喜樹堿兩種植物抗癌藥物的方法。

背景技術(shù)

喜樹堿是一種植物抗癌藥物，對(duì)腸胃道和頭頸部癌等有較好的近期療效。傳統(tǒng)的喜樹堿是從我國中南、西南的喜樹的果實(shí)與根皮中提取得到的。然后喜樹堿在喜樹中的含量極低，單靠從喜樹中提取顯然無法滿足喜樹堿的應(yīng)用需求。1976年，中國化學(xué)家高怡生等成功合成了消旋喜樹堿，開啟了國內(nèi)人工合成喜樹堿的新紀(jì)元。之后，又陸續(xù)有科學(xué)家們改進(jìn)了喜樹堿人工合成的方法。然而人工合成的喜樹堿畢竟不是天然的，生產(chǎn)工藝與成本也較高，使得人工合成方法根本無法推廣。

臭馬比木是一種運(yùn)用高科技手段在廣東省境內(nèi)人工種植的藥用植物，國外有文獻(xiàn)（phytochemry,?1972）報(bào)道了該植物中含有喜樹堿，并且其含量高達(dá)萬分之二點(diǎn)五。這為喜樹堿的人工提取帶來了利好消息。2008年，公開號(hào)為CN101289452A?公開了一種從臭馬比木中提取喜樹堿的方法，該方法采用萃取技術(shù)，從臭馬比木的枝葉中提取了高純度喜樹堿。但該方法采用傳統(tǒng)的提取手段，其產(chǎn)量仍然有待提高。

發(fā)明內(nèi)容

為克服傳統(tǒng)喜樹堿提取量低的缺陷，本發(fā)明提供一種先利用微生物發(fā)酵再進(jìn)行高純度喜樹堿和9-羥甲基喜樹堿提取的方法。該方法能夠極大提高馬比木嫩葉和嫩枝中的喜樹堿含量，從而提高喜樹堿的得率。

本發(fā)明提供一種從臭馬比木的嫩葉和嫩枝中提取喜樹堿的方法，其步驟包括：

（1）預(yù)處理：選取新鮮的臭馬比木嫩葉和嫩枝，干燥后研磨成粉末；

（2）發(fā)酵：按酶料比1.5：1(w/w)加入發(fā)酵液，發(fā)酵1~3天；發(fā)酵溫度為20~37℃；

所述發(fā)酵液為安琪高糖干酵母或發(fā)利干酵母，其濃度為1~11‰(w/w)；

（3）提取：在發(fā)酵產(chǎn)物中按0.5~3：1(w/w)的比例加入提取液，加熱提取；所述提取液為濃度為10~90%的乙醇溶液；所述加熱提取的溫度控制在40~75℃之間。

（4）過濾：濾取上清液，即得提取液；

（5）濃縮：在上述提取液中加入0.5~10%（W/V）的二氧化硫和硫酸亞鐵（抗氧化劑），濃縮，得濃縮物；

（6）萃取：在濃縮物中加入萃取劑對(duì)濃縮物進(jìn)行萃取，并回收萃取劑，得到萃取濃縮物，所述萃取劑為石油醚或二氯甲烷；

（7）、純化：在萃取濃縮物中加入10%~90%的丙酮溶液，先采用硅膠柱層析，初步結(jié)晶度達(dá)到70%左右；再進(jìn)行低壓柱層柱，結(jié)晶純度達(dá)到80%左右；再采用FLASH中壓柱層析，收集洗脫液，其結(jié)晶純度達(dá)到95%左右；最后進(jìn)行重結(jié)晶，得到純度為99%成品。

所述的重結(jié)晶是在洗脫液中按3：2：6的比例加入甲醇、丙酮、二甲基甲酰胺?(w/w)進(jìn)行重結(jié)晶，收集結(jié)晶體涼干，即得到純度達(dá)99%的喜樹堿。

本發(fā)明又提供了一種從臭馬比木的嫩葉和嫩枝中提取9-羥甲基喜樹堿的方法，其步驟包括：

（1）預(yù)處理：選取新鮮的臭馬比木嫩葉和嫩枝，干燥后研磨成粉末；

（2）發(fā)酵：按酶料比1.5：1加入發(fā)酵液，發(fā)酵1~3天；發(fā)酵溫度為20~37℃，所述發(fā)酵液為安琪高糖干酵母或發(fā)利干酵母，其濃度為1~11‰(w/w)；

（3）提取：在發(fā)酵產(chǎn)物中加入提取液，加熱提取；所述提取液為乙醇溶液，其濃度為：10~90%，所述加熱提取，溫度控制在40~75℃之間；

（4）濃縮：在上述提取液中加入0.5~10%的二氧化硫和硫酸亞鐵（抗氧化劑），濃縮，得濃縮浸膏；

（5）萃取：在濃縮物中加入萃取劑對(duì)濃縮物進(jìn)行萃取，并回收萃取劑，得到萃取濃縮物。所述萃取劑為石油醚或二氯甲烷；

（6）分離：在萃取濃縮物中加入丙酮溶液，攪拌均勻后靜置12~48小時(shí)，抽濾，保留濾液與濾餅；將濾餅用丙酮或乙酸乙酷或氯代甲烷溶解，攪伴后再次抽濾，回收濾液，兩次濾液混合，得到的濾液為含9-羥甲氫基喜樹堿的粗品；

（7）純化：將9-羥甲氫基喜樹堿的粗品進(jìn)行柱層析，分段收集洗脫液進(jìn)行HPLC檢測(cè)，純度大于98%的組分直接濃縮干燥，粉碎，得到成品；純度小于90%重復(fù)柱層析；純度在90%~98%間的加丙酮進(jìn)行重結(jié)晶，直到9-羥甲氫基喜樹堿的純度大于等于98%，晶體干燥粉碎，得到成品。所述洗脫液為丙酮，或脂肪醇，其濃度為20~90%?（w/w）。

具體實(shí)施方式

下面的實(shí)施案例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步詳細(xì)描述，但其不意味著對(duì)本發(fā)明的任何限制。