[發明專利]具有體外腫瘤靶向作用的經葉酸配體修飾的氧化鐵納米顆粒與其制備方法及體外評價方法

無效

• 申請號: 201210029970.5
• 申請日: 2012-02-11
• 公開（公告）號: CN102539760A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 劉東
• 申請（專利權）人: 劉東
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543;C12Q1/02
• 代理公司: 寧波市天晟知識產權代理有限公司 33219
• 代理人: 張文忠;袁廣興

技術領域

本發明涉及一種氧化鐵納米顆粒的制備方法，具體地說是具有體外腫瘤靶向作用的經葉酸配體修飾的氧化鐵納米顆粒與其制備方法及體外評價方法。

背景技術

我國每年大約有250萬名新增癌癥病人，其中大多數在確診時，已進入癌癥中晚期。如果要實現對腫瘤的有效治療，重要的一點是能通過各種技術來實現腫瘤的早期診斷。因此，檢查技術優劣直接關系到癌癥治療效果的好壞。

腫瘤納米技術與納米藥物研究剛剛起步，需要利用納米技術、生物學、化學、物理、醫學、藥學和公共衛生等領域的知識和研究手段。納米藥物既是國際科學前沿，也是與人類健康和生活密切相關的重要社會問題，充滿了創新的機遇。

隨著納米研究的深入和人們對納米控制能力的提高，納米技術為工程科技研究和技術變革帶來了激動人心的機會。就醫藥科學而言，納米技術有望在癌癥、心血管病、糖尿病、脊髓損傷等的藥物治療等領域取得突破。納米技術將對生物醫學研究中產生新的變革，并將為疾病的預防、檢測、早期診斷和治療提供新的方法和藥物。納米藥物全新的治療機理將有可能從觀念上改變人類疾病預防和治療的模式和途徑，是取得納米藥物研究突破的關鍵，但是難度也更大。

納米科學的快速進步，為生物醫藥的發展帶來了新的機遇。如何通過發展和利用納米技術去預防、檢測、早期診斷和治療人類疾病，如何確保納米藥物的安全性是擺在各國科學家面前的極富挑戰的課題。

癌癥是21世紀最具挑戰性的醫學問題之一。盡管為攻克癌癥，中外科學家進行了數十年的不懈努力，但至今絕大多數的癌癥的預防、早期診斷和治療仍不盡如人意。世界范圍內癌癥的死亡率居高不下，成為人類主要健康“殺手”。納米技術為腫瘤的早期診斷和治療提供了新的思路和方法。科學發現，人類的一些惡性腫瘤細胞具有對于葉酸受體的高表達。如果能制備一種具有葉酸配體修飾的靶向試劑或藥物就能很好地檢測和治療癌癥。

雖然很多專利可能都提到了如何制備四氧化三鐵氧化鐵納米顆粒等，但是制備葡聚糖-氧化鐵納米粒或葉酸-葡聚糖-氧化鐵納米粒的方法由于制備工藝本身就具有經驗性的特點，而且，各專利發明人或者廠家對于工藝細節的刻意保密，公開提供的信息有限，使得許多文獻中提到的許多制備方法和實驗方案難以重復實施，或者即使能夠重復實施，所制得的納米顆粒或其懸液等狀態也不穩定。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對上述現有技術現狀，而提供核心是氧化鐵，其外殼主要為葉酸的氧化鐵納米顆粒，能有效識別腫瘤細胞的具有體外腫瘤靶向作用的經葉酸配體修飾的氧化鐵納米顆粒與其制備方法及一種體外評價方法。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：

具有體外腫瘤靶向作用的經葉酸配體修飾的氧化鐵納米顆粒，其中，氧化鐵納米顆粒以氧化鐵為內核，該氧化鐵納米顆粒的表面以葉酸進行共價修飾。

為優化上述技術方案，采取的措施還包括：

氧化鐵納米顆粒的表面吸附有活性劑粒子，所述的活性劑粒子為葡聚糖分子；該氧化鐵納米顆粒為葉酸-葡聚糖-氧化鐵納米粒。

制備經葉酸配體修飾的氧化鐵納米顆粒的方法，其中，包括以下步驟：

步驟1、合成Fe₃O₄粒子懸浮液；

步驟2、將以去離子水為載液的葡聚糖溶液與Fe₃O₄粒子懸浮液混合后加熱、回流，冷卻后透析，離心過濾，得穩定的葡聚糖-氧化鐵納米粒懸浮液；

步驟3、取步驟2制備的葡聚糖-氧化鐵納米粒懸浮液，加入一半體積的無水乙醇，離心處理，傾去上清液，取沉淀物，并將沉淀物分別用無水乙醇、二甲亞砜清洗，再經無水二甲亞砜超聲分散，得葡聚糖-氧化鐵納米粒的無水二甲亞砜溶液；

步驟4、將無水二甲亞砜加至葉酸溶液并攪拌使其充分溶解后，再加入二環己基碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺及三乙胺溶液，避光，充氮，待混合液反應后，過濾出去沉淀物，將過濾后溶液加入含丙酮的乙醚溶液中，充分攪拌，濾去溶液，將余物真空干燥即得葉酸活性酯；

步驟5、將葉酸活性酯加入葡聚糖-氧化鐵納米粒的無水二甲亞砜溶液，使葉酸活性酯溶解，充氮，避光，加熱，并加入三乙胺作為催化劑，待溶液停止反應后，對溶液進行磁性分離，并對分離物分別用無水乙醇和蒸餾水清洗，真空干燥，即得葉酸-葡聚糖-氧化鐵納米粒。