[發明專利]具有體外腫瘤靶向作用的經葉酸配體修飾的氧化鐵納米顆粒與其制備方法及體外評價方法

無效

• 申請號: 201210029970.5
• 申請日: 2012-02-11
• 公開（公告）號: CN102539760A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 劉東
• 申請（專利權）人: 劉東
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543;C12Q1/02
• 代理公司: 寧波市天晟知識產權代理有限公司 33219
• 代理人: 張文忠;袁廣興

1.具有體外腫瘤靶向作用的經葉酸配體修飾的氧化鐵納米顆粒，其特征是：氧化鐵納米顆粒以氧化鐵為內核，該氧化鐵納米顆粒的表面以葉酸進行共價修飾。

2.根據權利要求1所述的具有體外腫瘤靶向作用的經葉酸配體修飾的氧化鐵納米顆粒，其特征是：所述的氧化鐵納米顆粒的表面附有活性劑粒子，所述的活性劑粒子為葡聚糖分子；該氧化鐵納米顆粒為葉酸-葡聚糖-氧化鐵納米粒。

3.制備如權利要求1所述的經葉酸配體修飾的氧化鐵納米顆粒的方法，其特征是：包括以下步驟：

步驟1、合成Fe₃O₄粒子懸浮液；

步驟2、將以去離子水為載液的葡聚糖溶液與Fe₃O₄粒子懸浮液混合后加熱、回流，冷卻后透析，離心過濾，得穩定的葡聚糖-氧化鐵納米粒懸浮液；

步驟3、取步驟2制備的葡聚糖-氧化鐵納米粒懸浮液，加入一半體積的無水乙醇，離心處理，傾去上清液，取沉淀物，并將沉淀物分別用無水乙醇、二甲亞砜清洗，再經無水二甲亞砜超聲分散，得葡聚糖-氧化鐵納米粒的無水二甲亞砜溶液；

步驟4、將無水二甲亞砜加至葉酸溶液并攪拌使其充分溶解后，再加入二環己基碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺及三乙胺溶液，避光，充氮，待混合液反應后，過濾出去沉淀物，將過濾后溶液加入含丙酮的乙醚溶液中，充分攪拌，濾去溶液，將余物真空干燥即得葉酸活性酯；

步驟5、將葉酸活性酯加入葡聚糖-氧化鐵納米粒的無水二甲亞砜溶液，使葉酸活性酯溶解，充氮，避光，加熱，并加入三乙胺作為催化劑，待溶液停止反應后，對溶液進行磁性分離，并對分離物分別用無水乙醇和蒸餾水清洗，真空干燥，即得氧化鐵納米顆粒，該氧化鐵納米顆粒為葉酸-葡聚糖-氧化鐵納米粒。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征是：所述的步驟1中的Fe₃O₄粒子懸浮液的制備方法為采用混合有Fe³⁺和Fe²⁺的鐵鹽溶液，無氧條件下，加入堿溶液，通氮除氧處理，快速攪拌并逐漸加溫，待其反應后濾去上層液體，得到Fe₃O₄沉淀物，將Fe₃O₄沉淀物加少量蒸餾水超聲分散，透析過濾得Fe₃O₄粒子懸浮液。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征是：所述的Fe³⁺和Fe²⁺的鐵鹽溶液中三價鐵鹽與二價鐵鹽的摩爾比為2:1至3:2之間，且PH值為2至4之間，加堿液過程中，PH值逐步變化為9至11，最高不得超過12，快速攪拌并逐漸加溫至55℃，最高不得超過60℃。

6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征是：所述的步驟2中葡聚糖溶液中的葡聚糖與加入葡聚糖溶液的鐵之間的質量比為5:1且混合后的溶液加熱至100℃回流時間為1小時。

7.根據權利要求3所述的制備方法，其特征是：所述的步驟4中的過濾后溶液逐滴在充分攪拌的情況下加入到5℃以下含30%丙酮的乙醚溶液中。

8.體外評價如權利要求1所述的經葉酸配體修飾的氧化鐵納米顆粒的方法，其特征是：將相同的口腔表皮癌細胞株分為A、B兩組，將葉酸-葡聚糖-氧化鐵納米粒與A組細胞株孵化，葡聚糖-氧化鐵納米粒與B組細胞株孵化，然后采用菲洛嗪法測定細胞內鐵含量、普魯士藍鐵染色法定量和定性考察葉酸-葡聚糖-氧化鐵納米粒與葡聚糖-氧化鐵納米粒的腫瘤選擇性。