[發明專利]一種從黃霉素預混劑中提取、純化制備黃霉素A對照品的方法

無效

• 申請號: 201210029457.6
• 申請日: 2012-02-10
• 公開（公告）號: CN102603817A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 李賢良;郗存顯;王國民;李應國;唐柏彬;張雷
• 申請（專利權）人: 重慶出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C07H13/12
• 分類號: C07H13/12;C07H1/06
• 代理公司: 重慶市恒信知識產權代理有限公司 50102
• 代理人: 劉小紅

1.一種從黃霉素預混劑中提取、純化制備黃霉素A對照品的方法，包括如下步驟：

（1）提取

以每mL甲醇與0.4g黃霉素預混劑的比例混合二者并加入離心試管中，將離心試管置于超聲提取器中，超聲提取30min，每10min振蕩一次，8000轉/min下離心3min，將上清液轉移至旋轉蒸發瓶中；

在殘渣中加入甲醇按照上述步驟，重復提取2次；

合并每次提取的上清液，40℃水浴旋轉蒸發濃縮至干，得到提取物；

（2）SPE純化

依次用4mL乙酸乙酯、4mL甲醇和4mL水活化C₁₈固相萃取小柱，控制流速為1～2mL/min；將提取物用10mL超純水溶解，并全部加于固相萃取小柱上，并擠干柱床上的水分，依次用4mL5%甲醇溶液、4mL正己烷與二氯甲烷的混合溶液、4mL乙酸乙酯和6mL乙酸乙酯與甲醇的混合溶液淋洗除雜；最后用6mL甲醇將黃霉素從固相萃取小柱中解析，將解析液于40℃水浴旋轉蒸發濃縮至干，得到黃霉素純化產物；將純化產物轉移至稱量皿中，-75℃真空冷凍干燥5h，即得黃褐色黃霉素A粗產品；

（3）HPLC純化

稱取黃霉素A粗產品，用流動相溶解并稀釋成2～10mg/mL，過0.45mm濾膜，按下列條件分離純化，收集洗脫液；

分離純化條件：

色譜柱：Agela?Technologies?Venusil?MP?C18，250?mm?×?4.6?mm，5?mm;

柱溫：30℃；

流動相：0.2%甲酸銨：乙腈，體積比為55:45；

流速：1.0mL/min；

進樣量：50?mL；

檢驗波長：258nm；

（4）濃縮、干燥

將收集的洗脫液減壓濃縮去除乙腈，得到濃縮液；控制流速1～2?mL/min，將濃縮液全部過C₁₈固相萃取小柱；用10mL超純水淋洗C₁₈固相萃取小柱；用10mL甲醇解析C₁₈固相萃取小柱，直至解析液中沒有黃霉素A；將收集解析液在40℃水浴下氮吹儀濃縮至干，轉移至稱量皿后真空冷凍干燥，即得淡黃色的黃霉素A對照品；

（5）純度鑒定

稱取一定量的黃霉素A對照品，用水溶解，用紫外分光光度計測定258nm下的吸光度，計算黃霉素A的純度。

2.根據權利要求1所述一種從黃霉素預混劑中提取、純化制備黃霉素A對照品的方法，其特征是:步驟（2）中所述正己烷與二氯甲烷的混合溶液中二者的體積比為1:1；所述乙酸乙酯與甲醇的混合溶液中二者的體積比為3:1。

3.根據權利要求1所述一種從黃霉素預混劑中提取、純化制備黃霉素A對照品的方法，其特征是:步驟（3）中收集洗脫液應在黃霉素A色譜峰達到檢測器20秒后開始，完全通過檢測器后10秒結束。

4.根據權利要求1所述一種從黃霉素預混劑中提取、純化制備黃霉素A對照品的方法，其特征是:步驟（5）中黃霉素A的純度達到93%～99％。