[發明專利]用于純化高分子量透明質酸的有效方法

有效

• 申請號: 201210027481.6
• 申請日: 2007-07-06
• 公開（公告）號: CN102617754A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: V·蘭加斯瓦米;V·桑托什;J·達門德拉;V·納塔拉;H·維蘭卡;A·卡帕特
• 申請（專利權）人: 利萊恩斯生命科學有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08;C12P19/04;C12R1/46
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;劉健

本申請是申請日為2007年7月6日的中國專利申請200780033000.X“用于純化高分子量透明質酸的有效方法”的分案申請。

與相關申請的交叉參考

本申請要求2006年7月6日提交的印度臨時申請號1065/MUM/2006和2006年11月13日提交的1874/MUM/2006的利益，其內容整體并入本文作為參考。

技術領域

本發明涉及改進的用于生產和純化透明質酸和它的鹽的技術。本發明也涉及具有生物醫學應用的透明質酸和它的鹽的生產和工藝最優化和純化。

背景技術

透明質酸(HA)是一種在細菌和包括人類在內的高等動物中具有生物功能的天然存在的生物聚合物。天然存在的HA可以在高等動物組織中發現，尤其作為胞間隙填充物(Balazs，Viscosupplementation：a?new?concept?in?the?treatment?of?osteoarthritis.J.Rheumatol.Suppl.；39：3-9，(Aug.1993))。它在眼睛玻璃體液和關節滑液中的濃度最高(O′Regan，M.，Martini，I.，Crescenzi，F.，De?Luca，C，和Lansing，M.，Molecular?mechanisms?and?genetics?of?hyaluronan?biosynthesis.International?Journal?of?Biological?Macromolecules?16：283-286(1994))。在革蘭氏陽性的鏈球菌(Streptococci)中，發現它是圍繞在細菌周圍的粘液樣莢膜。

透明質酸也稱作乙酰透明質酸或透明質酸鹽，是一種在結締組織、上皮組織和神經組織中廣泛分布的糖胺聚糖。它是胞外基質的主要組分之一。它主要有助于細胞增殖和遷移，且也可以參與有些惡性腫瘤的進展。乙酰透明質酸天然地存在于許多身體組織中，例如皮膚、軟骨和玻璃體液。因此它非常適用于靶向這些組織的生物醫學應用。在二十世紀七十年代和八十年代開發了第一種乙酰透明質酸生物醫學產品并批準用于眼外科手術(即，角膜移植術、內障外科、青光眼外科手術和修復視網膜剝離的外科手術)。其它生物醫學公司也生產用于眼外科手術的乙酰透明質酸品牌。

乙酰透明質酸也用于治療膝蓋的骨關節炎。這樣的治療作為向膝關節中的注射過程來施用，且可以用于補充關節液的粘性，從而潤滑關節、緩沖關節和產生鎮痛作用。乙酰透明質酸也可以對軟骨細胞具有積極的生化效應。

由于它的高生物相容性和它常存在于組織的胞外基質中，乙酰透明質酸在組織工程研究中作為生物材料支架日益得到普及。在有些癌癥中，乙酰透明質酸水平與惡性腫瘤和預后差非常相關。乙酰透明質酸可以用作前列腺癌和乳腺癌的腫瘤標記。它也可以用于監控這些疾病的進展。

乙酰透明質酸也可以在手術后用于誘導組織愈合，特別在內障外科后。現有的傷口愈合模型提出，更大的透明質酸聚合物出現在愈合早期，以在物理上為介導免疫應答的白細胞騰出空間。乙酰透明質酸是皮膚護理產品中的常見成分。

術語“透明質酸鹽”是指透明質酸(HA)的共軛堿。因為該分子通常以它的聚陰離子形式存在于體內，所以它最常見地稱作“乙酰透明質酸”。HA包含由通過β1-3和β1-4糖苷鍵交替連接的葡糖醛酸(GlcUA)和N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)組成的線性的、不分支的、聚陰離子二糖單元，如圖1所示。HA是糖胺聚糖家族的成員，該家族包括硫酸軟骨素、硫酸皮膚素(dermatin?sulphate)和硫酸乙酰肝素。不同于該家族的其它成員，它不共價結合蛋白。

在中性水溶液中，由于氫鍵形成，水分子和鄰近的羧基和N-乙酰基賦予聚合物構象勁度，這限制了它的柔性。氫鍵形成導致聚合物的獨特的水結合和保留能力。因而也斷定，水結合能力與該分子的分子量直接相關。已知每克HA可以結合最高達6升水(Sutherland，Novel?and?established?applications?of?microbial?polysaccharides.Trends?Biotechnol16：41-46，1998)。