[發(fā)明專利]腫瘤靶向光敏免疫偶聯(lián)物的制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210025957.2
• 申請日: 2012-02-06
• 公開（公告）號: CN102585003B
• 公開（公告）日: 2017-10-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃明東;周山勇;陳卓;陳錦燦;胡萍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院福建物質(zhì)結(jié)構(gòu)研究所
• 主分類號: C07K16/30
• 分類號: C07K16/30;C07K1/107;A61K41/00;A61K47/68;A61P35/00
• 代理公司: 北京知元同創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11535
• 代理人: 劉元霞

1.酞菁鋅-單克隆抗體腫瘤靶向光敏免疫偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于：利用單取代酞菁衍生物與單克隆抗體共價(jià)偶聯(lián)，所述單取代酞菁衍生物是水溶性單羧基酞菁鋅酰肼衍生物ZnPC-CO-5K-NHNH₂，所述的單克隆抗體是具有如下特征的單克隆抗體：1)分子量：150-170KDa；2)吸光特性：280nm具有特征吸收峰；3)生物學(xué)特性：單克隆抗體，能特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面生長因子受體，并與之發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)；所述制備方法包括：

1)將單羧基取代酞菁鋅ZnPc-COOH與表面帶有五聚賴氨酸的樹脂反應(yīng)，再用水合肼肼解，脫去保護(hù)基，形成水溶性單羧基酞菁鋅酰肼衍生物ZnPC-CO-5K-NHNH₂；

2)抗體氧化：單克隆抗體在PH7.2的磷酸鹽緩沖液中，加入終濃度10mM的高碘酸鈉，25℃氧化30min后，加入終濃度10mM的抗壞血酸，將殘留的高碘酸鈉徹底還原成碘離子；

3)將氧化后的單克隆抗體與ZnPC-CO-5K-NHNH₂偶聯(lián)，取氧化后的單克隆抗體與單羧基酞菁鋅酰肼衍生物按摩爾比1∶10，溶于PH7.2的磷酸鹽緩沖液中，混勻，4℃冰箱避光渦旋震蕩過夜后，加入還原劑，4℃冰箱，反應(yīng)4h，形成穩(wěn)定偶聯(lián)物。

2.酞菁鋅-單克隆抗體腫瘤靶向光敏免疫偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于：利用單取代酞菁衍生物與單克隆抗體共價(jià)偶聯(lián)，所述單取代酞菁衍生物是水溶性單羧基酞菁鋅酰肼衍生物ZnPC-CO-5K-NHNH₂，所述的單克隆抗體包括曲妥珠單抗、西妥昔單抗或尼妥珠單抗；所述制備方法包括：

1)將單羧基取代酞菁鋅ZnPc-COOH與表面帶有五聚賴氨酸的樹脂反應(yīng)，再用水合肼肼解，脫去保護(hù)基，形成水溶性單羧基酞菁鋅酰肼衍生物ZnPC-CO-5K-NHNH₂；

2)抗體氧化：單克隆抗體在PH7.2的磷酸鹽緩沖液中，加入終濃度10mM的高碘酸鈉，25℃氧化30min后，加入終濃度10mM的抗壞血酸，將殘留的高碘酸鈉徹底還原成碘離子；

3)將氧化后的單克隆抗體與ZnPC-CO-5K-NHNH₂偶聯(lián)，取氧化后的單克隆抗體與單羧基酞菁鋅酰肼衍生物按摩爾比1∶10，溶于PH7.2的磷酸鹽緩沖液中，混勻，4℃冰箱避光渦旋震蕩過夜后，加入還原劑，4℃冰箱，反應(yīng)4h，形成穩(wěn)定偶聯(lián)物。