[發明專利]一種改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法

無效

• 申請號: 201210025667.8
• 申請日: 2012-02-07
• 公開（公告）號: CN102577948A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 張寧;吳殿星;舒小麗
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 韓介梅

技術領域

本發明涉及一種水稻的培育方法，尤其是改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法。

背景技術

據衛生部的統計，2010年我國糖尿患者約9200萬人，占我國總人口的9.3%，耐糖量低人群更是高達1.42億人。

糖尿病等血液系統慢性疾病正在呈現出快速增長、向農村蔓延、低齡化的演變趨勢，越來越嚴重地影響著人類社會的生存和發展（第一大生命殺手，嚴重影響生命質量，年醫療費用高達千億元），而且目前尚無根治之法。

醫學研究表明：除遺傳因素外，糖尿病等血液系統慢性疾病主要起因于日常飲食起居等生活習慣，而高糖、高脂肪、高蛋白的飲食結構則是罪魁禍首，尤其是高糖這一“元兇”。稻米主食“高糖”的核心在于可消化淀粉的比例過高（導致貪食、肥胖和高血糖），而抗性淀粉的比例過低（目前一般秈稻米的抗性淀粉含量僅為1%，粳稻的含量僅有0.1%，而達到現代人健康需求的含量應為10%）。

因此，依照我國傳統?“藥食同源”、“寓藥于食”?的理念，預防糖尿病等高危慢性病的發生，改進病患者生活質量的重要途徑是改善一日三餐的大米營養構成，而培育滿足人們健康需求的美味口感與功能性水稻品種則是這一途徑的根本。高抗性淀粉含量專用水稻品種選育與開發是吃出健康的關鍵和核心。抗性淀粉的形成，不但與水稻本身的直連淀粉含量直接有關，也與支鏈淀粉的鏈長結構密切相關，同時與淀粉晶體結構相關。可溶性淀粉合成酶基因ssIII-2，在支鏈淀粉合成過程中具有特定的功能，主要負責支鏈淀粉中等長度支鏈的合成，對分支鏈短鏈的延伸，中長鏈的合成起明顯作用，促進晶體層的形成并影響著淀粉的晶體模式。

發明內容

正是在上述背景下，本發明的目的是提出一種改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法，以獲得高抗性淀粉含量水稻，實施飲食療法從源頭預防和控制糖尿病。

本發明的改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法，包括以下步驟：

1）取直鏈淀粉含量25%以上水稻品種的成熟胚為外植體，接種至誘導培養基，在25±1℃、光強3000勒克司光條件下誘導形成愈傷組織；

?2）將誘導形成2周的愈傷組織，轉移至繼代培養基，繼代培養至愈傷組織進入成倍增殖期；

?3）將成倍增殖的愈傷組織，在25±1℃避光的黑暗條件下進行受體愈傷組織的預培養2天；

4）將經過預培養的愈傷組織，在農桿菌懸浮液中浸泡10分鐘，之后棄去菌液，用無菌濾紙吸干，接種于共培養基上，在25±1℃避光的黑暗條件下共培養2天；

5）將上述共培養愈傷組織，洗凈、晾干后，轉移到篩選培養基，在25±1℃避光的黑暗條件下培養6周，收集新長出的抗性愈傷組織，轉移至新的篩選培養基上，再進行連續2輪繼代篩選，每隔3周轉繼１次；

6）取3輪篩選后的抗性愈傷組織，轉移至分化培養基，在25±1℃、光強3000勒克司光條件下誘導分化成苗，對抗性植株進行組織化學染色和分子檢測，選留含目的基因插入序列的的轉基因植株，所說的目的基因插入序列是指目的基因可溶性淀粉合成酶基因ssIII-2、標記基因葡糖苷酸酶基因GUS和篩選基因抗潮霉素基因HPT的插入序列，目的基因可溶性淀粉合成酶基因ssIII-2片段長780bp；

7）取入選的轉基因植株，田間種植后收獲種子，測定熱米飯的抗性淀粉含量，選留抗性淀粉含量高于10%的轉基因植株；

8）繼續種植步驟7）篩選的轉基因株系，評價抗性淀粉含量的表達穩定性，繁殖抗性淀粉含量穩定高于10%的優良株系，為培育的改良抗性淀粉含量的水稻。

本發明中，所說的誘導培養基為N6基本培養基添加2,4-D1.5mg、蔗糖30g和瓊脂粉6.8g，pH滅菌前5.8。

本發明中，所說的繼代培養基為N6基本培養基添加2,4-D?1mg蔗糖30g和瓊脂粉6.8g，pH滅菌前5.8。

本發明中，所說的共培養基為N6基本培養基添加2,4-D?0.5mg、乙酰丁香酮1mg、蔗糖30g和瓊脂粉6.8g，pH滅菌前5.8。

本發明中，所說的篩選培養基為N6基本培養基添加2,4-D?0.5mg、潮霉素30mg、羧卞300?mg、蔗糖30g和瓊脂粉6.8g，pH滅菌前5.8。

本發明中，所說的分化培養基為N6基本培養基添加6-BA1mg、NAA0.5mg、KT0.5mg、羧卞200mg、蔗糖30g和瓊脂粉6.8g，pH滅菌前5.8。