[發(fā)明專利]一種改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210025667.8
• 申請(qǐng)日: 2012-02-07
• 公開（公告）號(hào): CN102577948A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張寧;吳殿星;舒小麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 韓介梅

1.?一種改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法，包括以下步驟：

1）取直鏈淀粉含量25%以上水稻品種的成熟胚為外植體，接種至誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在25±1℃、光強(qiáng)3000勒克司光條件下誘導(dǎo)形成愈傷組織；

?2）將誘導(dǎo)形成2周的愈傷組織，轉(zhuǎn)移至繼代培養(yǎng)基，繼代培養(yǎng)至愈傷組織進(jìn)入成倍增殖期；

?3）將成倍增殖的愈傷組織，在25±1℃避光的黑暗條件下進(jìn)行受體愈傷組織的預(yù)培養(yǎng)2天；

4）將經(jīng)過預(yù)培養(yǎng)的愈傷組織，在農(nóng)桿菌懸浮液中浸泡10分鐘，之后棄去菌液，用無菌濾紙吸干，接種于共培養(yǎng)基上，在25±1℃避光的黑暗條件下共培養(yǎng)2天；

5）將上述共培養(yǎng)愈傷組織，洗凈、晾干后，轉(zhuǎn)移到篩選培養(yǎng)基，在25±1℃避光的黑暗條件下培養(yǎng)6周，收集新長出的抗性愈傷組織，轉(zhuǎn)移至新的篩選培養(yǎng)基上，再進(jìn)行連續(xù)2輪繼代篩選，每隔3周轉(zhuǎn)繼１次；

6）取3輪篩選后的抗性愈傷組織，轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基，在25±1℃、光強(qiáng)3000勒克司光條件下誘導(dǎo)分化成苗，對(duì)抗性植株進(jìn)行組織化學(xué)染色和分子檢測，選留含目的基因插入序列的的轉(zhuǎn)基因植株，所說的目的基因插入序列是指目的基因可溶性淀粉合成酶基因ssIII-2、標(biāo)記基因葡糖苷酸酶基因GUS和篩選基因抗潮霉素基因HPT的插入序列，目的基因可溶性淀粉合成酶基因ssIII-2片段長780bp；

7）取入選的轉(zhuǎn)基因植株，田間種植后收獲種子，測定熱米飯的抗性淀粉含量，選留抗性淀粉含量高于10%的轉(zhuǎn)基因植株；

8）繼續(xù)種植步驟7）篩選的轉(zhuǎn)基因株系，評(píng)價(jià)抗性淀粉含量的表達(dá)穩(wěn)定性，繁殖抗性淀粉含量穩(wěn)定高于10%的優(yōu)良株系，為培育的改良抗性淀粉含量的水稻。

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法，其特征在于所說的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為N6基本培養(yǎng)基添加2,4-D1.5mg、蔗糖30g和瓊脂粉6.8g，pH滅菌前5.8。

3.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法，其特征在于所說的繼代培養(yǎng)基為N6基本培養(yǎng)基添加2,4-D?1mg、蔗糖30g和瓊脂粉6.8g，pH滅菌前5.8。

4.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法，其特征在于所說的共培養(yǎng)基為N6基本培養(yǎng)基添加2,4-D?0.5mg、乙酰丁香酮1mg、蔗糖30g、和瓊脂粉6.8g，pH滅菌前5.8。

5.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法，其特征在于所說的篩選培養(yǎng)基為N6基本培養(yǎng)基添加2,4-D?0.5mg、潮霉素30mg、羧卞300?mg、蔗糖30g和瓊脂粉6.8g，pH滅菌前5.8。

6.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法，其特征在于所說的分化培養(yǎng)基為N6基本培養(yǎng)基添加6-BA1mg、NAA0.5mg、KT0.5mg、羧卞200mg、蔗糖30g和瓊脂粉6.8g，pH滅菌前5.8。

7.?根據(jù)權(quán)利要求2-6所述的改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法，其特征在于所說的N6基本培養(yǎng)基為KNO₃?2830mg、(NH₄)₂SO₄?463mg、CaCl₂·2H₂O?166mg、MgSO₄·7H₂O?185mg、KH₂P0₄?400mg、MnSO₄·4H₂O?4.4mg、ZnSO₄·7H₂O?1.5mg、FeSO₄·7H₂O?27.8mg、Na₂-EDTA·2H2O?37.3mg、H₃BO₃?1.6mg、肌醇100mg、煙酸0.5mg、維生素B6?0.5mg、維生素B1?0.5mg和甘氨酸2mg。