[發明專利]一種依非巴特的制備方法

有效

• 申請號: 201210025197.5
• 申請日: 2012-02-06
• 公開（公告）號: CN102584944A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 文永均;祝傳斌;王曉莉;韓玉;童光彬
• 申請（專利權）人: 成都圣諾科技發展有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/107
• 代理公司: 成都虹橋專利事務所 51124
• 代理人: 武森濤

技術領域

本發明屬于多肽藥物制備方法技術領域，特別涉及一種新的依非巴特的制備方法。

背景技術

依非巴特(Eptifibatide)是一個合成的環七肽含有6個氨基酸和一個去氨基半胱氨酸(巰基丙酸)。這個藥是在一種barbourin結構的基礎上發明出來的。這是一種從東南侏儒型響尾蛇(Sistrurus?m.barbouri)的蛇毒中發現的多肽。依非巴特(Eptifibatide)是一種新型的血小板糖蛋白IIb/IIIa受體拮抗劑，它通過抑制血小板聚集的最后共同途徑，具有抗血小板作用強、起效快、不良反應少等優點。依非巴特(Eptifibatide)和GPIIb/IIIa受體結合的特異性是由于賴氨酸-甘氨酸-門冬氨酸(KGD)這一多肽序列，和整合素配體中存在的多肽序列RGD只有一個氨基酸的區別。此藥對GPIIb/IIIa受體有很高的親合力和很高的特異性，也有快速的離解率。其結果是清除半衰期較短，依非巴特(Eptifibatide)對血小板的抑制容易逆轉，在停止滴入藥物2至4小時內血小板功能即恢復到基線水平；不像阿昔單抗，依非巴特(Eptifibatide)沒有免疫源性，觀察到的血小板減少的發生頻率和普通肝素相似。

依非巴特(Eptifibatide)是一種特異性GPIIb/IIIa受體阻滯劑，在ACS病人中劑量依賴性地抑制體外血小板的聚集，在健康志愿者和行PCI術的病人中能抑制纖維原與二磷酸腺苷(ADP)活化的血小板的結合。本品對血小板糖蛋白IIb/IIIa受體的阻滯是可逆的，一旦出現不良反應可立即停藥，不良反應輕。

依非巴特具有以下的結構：

Mpr-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH₂

有關依非巴特的制備方法，國內外有報道。中國專利CN200910247949報道了依非巴特的Fmoc固相合成法，采用氨基樹脂為開始的載體樹脂，依次接入保護氨基酸，所得肽樹脂采用三氟醋酸(TFA)酸解。

在本產品結構中有1Harg和1個Gly，在固相法依次接入Fmoc-Gly過程中，由于Gly自身的特性和保護Harg結構的特性，在產品制備過程產生易產生以下雜質：[+1Gly]-依非巴特、[-1Gly]-依非巴特、和[-1Harg]-依非巴特，從使粗品純度大幅度降低，而這些雜質與依非巴特自身的極性相近，增大了純化的難度，產品總收率無法得到有效提高，同時影響產品純度，影響用藥的安全性。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供依非巴特的制備方法，該制備方法使用了新的保護氨基酸片段，直接避免了[+1Gly]-依非巴特、[-1Gly]-依非巴特、[-1Harg]-依非巴特雜質的產生，提高了產品收率和純度，反應效率高、有利于實現規模化的固相合成工藝。

本發明依非巴特的制備方法，包括固相多肽合成法制備依非巴特樹脂、依非巴特樹脂酸解得到依非巴特線性肽粗品、經氧化后得到依非巴特粗品，再經純化和換鹽得到依非巴特成品，其中固相多肽合成法制備依非巴特樹脂的方法為：在氨基樹脂上通過固相偶聯合成法依次接入下列序列中相對應的保護氨基酸或片段，得到依非巴特樹脂：

X-Y-Trp(R₁)-Pro-Cys(R₂)-氨基樹脂

其中，

R₁為Boc或H；

R₂為Trt或Acm；

X為Mpr(R₂)-Harg(R₃)，R₃為Pbf或H；

Y為Gly-Asp(OtBu)。

作為本發明優選的方案，接入X片段時，僅用1次固相偶聯合成反應，偶聯所使用的Fmoc-保護氨基酸或片段為Mpr(Trt)-Harg(R₃)-OH；

作為本發明優選的方案，接入Y片段時，

1)僅用1次偶聯直接接入，Fmoc-保護氨基酸或片段為Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-OH；或

2)分2次偶聯依次接入，Fmoc-保護氨基酸或片段為：第一次為Fmoc-Asp(OtBu)-OH、第二次為Fmoc-Gly-OH。

本發明接入X和Y以外的其它片段時保護氨基酸分別為：Fmoc-Trp(R₁)-OH，R₁為Boc或H；Fmoc-Pro-OH；Fmoc-Cys(R₂)-OH，R₂為Trt或Acm。