[發明專利]一種依非巴特的制備方法

有效

• 申請號: 201210025197.5
• 申請日: 2012-02-06
• 公開（公告）號: CN102584944A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 文永均;祝傳斌;王曉莉;韓玉;童光彬
• 申請（專利權）人: 成都圣諾科技發展有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/107
• 代理公司: 成都虹橋專利事務所 51124
• 代理人: 武森濤

1.一種依非巴特的制備方法，包括固相多肽合成法制備依非巴特樹脂、依非巴特樹脂酸解得到依非巴特線性肽粗品、經氧化后得到依非巴特粗品，再經純化和換鹽得到依非巴特成品，其中固相多肽合成法制備依非巴特樹脂的方法為：在氨基樹脂上通過固相偶聯合成法依次接入下列序列中相對應的保護氨基酸或片段，得到依非巴特樹脂：

X-Y-Trp(R₁)-Pro-Cys(R₂)-氨基樹脂

其中，

R₁為Boc或H；

R₂為Trt或Acm；

X為Mpr(R₂)-Harg(R₃)，R₃為Pbf或H；

Y為Gly-Asp(OtBu)。

2.根據權利要求1所述的依非巴特的制備方法，其特征在于：接入X片段時，僅用1次固相偶聯合成反應，偶聯所使用的Fmoc-保護氨基酸或片段為Mpr(Trt)-Harg(R₃)-OH，R₃為Pbf或H。

3.根據權利要求1或2所述的依非巴特的制備方法，其特征在于：接入Y片段時，

1)分1次偶聯直接接入，Fmoc-保護氨基酸或片段為Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-OH；或

2)分2次偶聯依次接入，Fmoc-保護氨基酸或片段為：第一次為Fmoc-Asp(OtBu)-OH、第二次為Fmoc-Gly-OH。

4.根據權利要求1-3任一項所述的依非巴特的制備方法，其特征在于：接入X和Y以外的其它的保護氨基酸分別為：Fmoc-Trp(R₁)-OH，R₁為Boc或H；Fmoc-Pro-OH；Fmoc-Cys(R₂)-OH，R₂為Trt或Acm。

5.根據權利要求1-4任一項所述的依非巴特的制備方法，其特征在于：接入各個氨基酸片段時，保護氨基酸的用量為載體樹脂總摩爾數的1.2～6倍，優選3倍。

6.根據權利要求1所述的依非巴特的制備方法，其特征在于：所述氨基樹脂取代值為0.3～1.5mmol/g樹脂，優選的Fmoc-Leu-取代值為0.5～1.0mmol/g樹脂。

7.根據權利要求6所述的依非巴特的制備方法，其特征在于：所述氨基樹脂選自RinkAmide樹脂、Rink?Amide?AM樹脂、Rink?MBHA樹脂和Sieber樹脂中的一種，優選為RinkAmide?MBHA樹脂。

8.根據權利要求1所述的依非巴特的制備方法，其特征在于：所述固相偶聯合成法是：前一步反應得到的保護氨基酸-樹脂脫去保護Fmoc后再與下一個保護氨基酸偶聯反應，偶聯反應時間為60～300分鐘，優選的為100～140分鐘。

9.根據權利要求1-8任一項所述的依非巴特的制備方法，其特征在于：依非巴特樹脂經酸解同時脫去樹脂及側鏈保護基得到依非巴特線性肽粗品：

Mpr-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH₂。

10.根據權利要求9所述的依非巴特的制備方法，其特征在于：依非巴特樹脂酸解時采用的酸解劑為三氟醋酸(TFA)、1，2-乙二硫醇(EDT)和水混合溶劑，混合溶劑的配比為：TFA的比列為80-95％(V/V)，EDT的比例為1～10％(V/V)，余量為水。

11.根據權利要求1～8任一項所述的依非巴特的制備方法，其特征在于：依非巴特線性肽粗品氧化后得到依非巴特粗品時，依非巴特線性肽先用醋酸溶解，過濾后用氧化劑氧化環化，依非巴特線性肽結構中的Mpr中的巰基SH和Cys中的SH經氧化形成二硫鍵S-S而得到所述氧化劑為碘、H₂0₂或DMSO中的至少一種。