[發明專利]一株分泌抗2型豬鏈球菌的型特異性單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其制備方法

無效

• 申請號: 201210023353.4
• 申請日: 2012-02-02
• 公開（公告）號: CN102533667A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 潘秀珍;唐家琪;王長軍;李先富;王忠燦
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍南京軍區軍事醫學研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/12;C12R1/91
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 夏平

1.一株分泌抗2型豬鏈球菌株的型特異性單克隆抗體的雜交瘤細胞株2A9，其特征在于該雜交瘤細胞株通過如下方法制備：

(1)采用滅活的2型豬鏈球菌菌株O5ZYH33多次免疫雌性BALB/c小鼠，使小鼠體內抗體達到最高峰時分離脾臟B淋巴細胞；

(2)將步驟(1)分離的脾臟B淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞融合；

(3)以甲醛滅活的O5ZYH33全菌抗原包被ELISA板，使用全菌ELISA篩選陽性克隆；再進一步以全菌裂解液為抗原用Western?blot法再次驗證ELISA篩選得到的陽性克隆，最終獲得雜交瘤細胞株2A9。

2.根據權利要求1所述的分泌抗2型豬鏈球菌的型特異性單克隆抗體的雜交瘤細胞株2A9，其特征在于：(1)選用雌性BALB/c小鼠，采用甲醛滅活的O5ZYH33分離株為免疫原，注射菌量為10⁷cfu/只鼠，間隔2周追加免疫共3次，在融合前3天加強免疫一次，菌量為10⁸cfu/只鼠。

3.一種制備分泌抗2型豬鏈球菌的型特異性單克隆抗體的雜交瘤細胞株的方法，其特征在于包含如下步驟：

(1)采用滅活的2型豬鏈球菌菌株O5ZYH33多次免疫雌性BALB/c小鼠，使小鼠體內抗體達到最高峰時分離脾臟B淋巴細胞；

(2)將步驟(1)分離的脾臟B淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞融合；

(3)以甲醛滅活的O5ZYH33全菌抗原包被ELISA板，使用全菌ELISA篩選陽性克隆；再進一步以全菌裂解液為抗原用Western?blot法再次驗證ELISA篩選得到的陽性克隆，最終獲得分泌抗2型豬鏈球菌的型特異性單克隆抗體的雜交瘤細胞株。

4.根據權利要求3所述的制備分泌抗2型豬鏈球菌的型特異性單克隆抗體的雜交瘤細胞株的方法，其特征在于：(1)選用雌性BALB/c小鼠，采用甲醛滅活的O5ZYH33分離株為免疫原，注射菌量為10⁷cfu/只鼠，間隔2周追加免疫共3次，在融合前3天加強免疫一次，菌量為10⁸cfu/只鼠。