[發明專利]CoxBIgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201210022021.4
• 申請日: 2012-01-31
• 公開（公告）號: CN102590504A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 崔貽芬
• 申請（專利權）人: 上海堯浩生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C07K14/085
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

技術領域

本發明涉及CoxB?IgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒。?

背景技術

柯薩奇B組(CoxB)病毒是腸道病毒的一種，柯薩奇B病毒感染后，可出現無菌性腦膜炎、肌麻庳、皰疹性咽峽炎、心肌炎和心包炎、急性出血性結膜炎等。柯薩奇B組有6個血清型。CoxB?IgG/IgM的測定能夠及早檢測出患者是否新近遭受CoxB病毒感染，特別對急性期的心肌炎進行CoxB?IgG/IgM的普查，將對心肌疾病提供診斷依據，特別是CoxB?IgM的陽性，將提示患者有可能心肌早期受到感染，同時可配合臨床診斷和觀察的有利指標，對患者的治療和康復有著重要的意義。?

目前柯薩奇B組病毒感染的診斷方法主要有三種，病毒分離鑒定、血清學檢查及分子生物學技術。病毒分離培養和分子生物學法繁復費事，傳統的病毒分離法耗時長，而PCR方法存在檢測成本昂貴且對環境交叉污染的風險高，無法滿足病毒流行期間同時處理大量樣本的需求，快速.準確。血清學的進展(快速法)開拓了該病毒的快速診斷技術，其具有高靈敏度及高特異性的優勢，在病毒感染的診斷中發揮了越來越重要的作用。?

發明內容

本發明的目的是克服現有技術中的缺陷，提供一種CoxB?IgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒。?

本發明采用了下述技術方案來解決上述技術問題：?

一種CoxB?IgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒，包括多孔酶聯板，分別裝有樣品稀釋液、陽性對照、陰性對照、IgG酶標抗體或IgM酶標抗體、底物A、底物B、濃縮洗滌液和終止液的試劑瓶，所述多孔酶聯板的微反應孔的內壁包被有CoxB組抗原。?

CoxB?IgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒即為CoxB?IgG或CoxB?IgM酶聯免疫法檢測試劑?盒。?

進一步的，所述多孔酶聯板為48孔酶聯板或96孔酶聯板。?

試劑盒中的樣品稀釋液也可采用常規的ELISA樣品稀釋液，如含有磷酸鹽緩沖液的樣品稀釋液，或者也可以為含有0.01M磷酸緩沖液(PBS，pH7.2-7.5)和＜0.1wt％NaN₃的10wt％小牛血清。?

試劑盒中的陽性對照為經病毒滅活的含有CoxB組IgG抗體或CoxB組IgM抗體的陽性血清。?

試劑盒中的陰性對照為陰性血清。?

試劑盒中的IgG酶標抗體為辣根過氧化物酶(HRP)標記的IgG抗體，IgG抗體可以是各種類型的IgG抗體，如鼠抗人IgG、羊抗人IgG或兔抗人IgG。?

試劑盒中的IgM酶標抗體為辣根過氧化酶(HRP)標記的μ鏈IgM抗體，.?

試劑盒中的底物A、底物B均為常規ELISA底物A和底物B。?

試劑盒中的濃縮洗滌液可采用常規的濃縮的ELISA洗滌液，如含有吐溫的磷酸鹽緩沖液，或者也可以為20X濃縮的0.01MPBS。?

試劑盒中的終止液可采用常規的ELISA終止液。?

多孔酶聯板上包被的CoxB組抗原的主要成分為純化并完全滅活的Cox?B1、Cox?B2、Cox?B3、Cox?B4、Cox?B5和Cox?B6病毒的混合。各病毒混合比例可根據檢測需要任意調整。一般情況下，以病毒總量為基礎計，各病毒的重量百分比均為6-20％。?

多孔酶聯板上包被抗原的方法采用常規。?

進一步的，所述CoxB組抗原采用包括下列步驟的方法制備獲得：?

1)病毒擴增：將選自Cox?B1、Cox?B2、Cox?B3、Cox?B4、Cox?B5和Cox?B6病毒中之任一的毒種接種至單層的Hela細胞中培養獲得細胞病毒液；?

2)病毒釋放：將細胞病毒液重復凍融三次以上，而后在冰水浴中超聲波破碎細胞；?

3)病毒滅活：將重復凍融三次以上的細胞病毒液或經超聲波破碎細胞的細胞病毒液完全滅活，滅活的細胞病毒液經病毒滅活試驗檢驗需呈陰性；?

4)病毒抗原純化：?

4.1將經病毒釋放與病毒滅活的細胞病毒液置于18-20℃融解適當時間后，加入甲醛水溶液混合均勻，甲醛在混合液中的終濃度為0.12-0.20v％；?

4.2混合液梯度離心分離病毒：?

4.3分離出的病毒加入保護液獲得病毒抗原液。?

5)利用步驟1-4分別制備Cox?B1、Cox?B2、Cox?B3、Cox?B4、Cox?B5和Cox?B6的病毒抗原液，將制得的Cox?B1、Cox?B2、Cox?B3、Cox?B4、Cox?B5和Cox?B6的病毒抗原液混合獲得CoxB組抗原。?