[發明專利]CoxBIgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201210022021.4
• 申請日: 2012-01-31
• 公開（公告）號: CN102590504A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 崔貽芬
• 申請（專利權）人: 上海堯浩生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C07K14/085
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種CoxB?IgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒，包括多孔酶聯板，分別裝有樣品稀釋液、陽性對照、陰性對照、IgG酶標抗體或IgM酶標抗體、底物A、底物B、濃縮洗滌液和終止液的試劑瓶，所述多孔酶聯板的微反應孔的內壁包被有CoxB組抗原。

2.如權利要求1所述CoxB?IgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒，其特征在于，多孔酶聯板上包被的CoxB組抗原的主要成分為經純化并完全滅活的Cox?B1、Cox?B2、Cox?B3、Cox?B4、Cox?B5和Cox?B6病毒的混合。

3.如權利要求1所述CoxB?IgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒，其特征在于，所述CoxB組抗原采用包括下列步驟的方法制備獲得：

1、病毒擴增：將選自Cox?B1、Cox?B2、Cox?B3、Cox?B4、Cox?B5和Cox?B6病毒中之任一的毒種接種至單層的Hela細胞中培養獲得細胞病毒液；

2、病毒釋放：將細胞病毒液重復凍融三次以上，而后在冰水浴中超聲波破碎細胞；

3、病毒滅活：將重復凍融三次以上的細胞病毒液或經超聲波破碎細胞的細胞病毒液完滅活，滅活的細胞病毒液經病毒滅活試驗檢驗需呈陰性；

4、病毒抗原純化：

4.1將經病毒釋放與病毒滅活的細胞病毒液置于18-20℃融解適當時間后，加入甲醛水溶液混合均勻，甲醛在混合液中的終濃度為0.12-0.20v％；

4.2混合液梯度離心分離病毒：

4.3分離出的病毒加入保護液獲得病毒抗原液；

5、利用步驟1-4分別制備Cox?B1、Cox?B2、Cox?B3、Cox?B4、Cox?B5和Cox?B6的病毒抗原液，將制得的Cox?B1、Cox?B2、Cox?B3、Cox?B4、Cox?B5和Cox?B6的病毒抗原液混合獲得CoxB組抗原。

4.如權利要求3所述CoxB?IgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒，其特征在于，步驟4.2中，梯度離心分離病毒具體包括下列步驟：

4.2.1混合液低速離心至少20分鐘，取上清；

4.2.2上清35000-45000rpm/min離心至少60分鐘，取沉淀；

4.2.3沉淀用PBS溶解后，置于13-17wt％甘油水溶液之上，50000-65000rpm/min離心60分鐘以上，取沉淀，沉淀即為分離出的病毒。

5.如權利要求4所述CoxB?IgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒，其特征在于，步驟4.2.1中，低速離心的離心速度為5000-8000rpm/min。

6.如權利要求4所述CoxB?IgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒，其特征在于，步驟4.2.3中，沉淀與PBS的體積比為1∶(2-3)。

7.如權利要求3所述CoxB?IgG/IgM酶聯免疫法檢測試劑盒，其特征在于，步驟4.3中，所述病毒與保護液的體積比為1∶(1-2)。