[發(fā)明專利]一種草莓抗連作障礙突變體的篩選方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210021686.3 | 申請日： | 2012-01-31 |
| 公開（公告）號： | CN103053415A | 公開（公告）日： | 2013-04-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 甄文超;劉雪靜;齊永志;馬燕會;代麗 | 申請（專利權(quán)）人： | 河北農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 071001 河北省保定市*** | 國省代碼： | 河北;13 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 草莓 連作 障礙 突變體 篩選 方法 | ||
1.一種利用草莓枯萎病菌尖孢鐮刀菌毒素和自毒物質(zhì)對羥基苯甲酸混合液作為選擇壓力誘導(dǎo)篩選抗枯萎病突變體的方法，其特征在于，以草莓組培苗葉段為誘導(dǎo)材料，選用愈傷組織最優(yōu)再生體系誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽，再將不定芽接種在含半致死劑量混合液的MS繼代培養(yǎng)基培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)接于較高濃度混合液培養(yǎng)基再繼代培養(yǎng)，并對分化和遺傳穩(wěn)定性強的小植株移栽于花盆中，通過接種尖孢鐮刀菌孢子懸浮液和澆灌自毒物質(zhì)對羥基苯甲酸，進一步鑒定植株抗病性、生長發(fā)育指標和結(jié)實性，從而篩選得到抗性突變體；具體步驟如下：
(1)?剪取組培苗葉段，將其接種于不同碳源、不同濃度TDZ或AgNO3的MS固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，篩選愈傷組織誘導(dǎo)最優(yōu)再生體系，得愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基；
(2)?將草莓葉段接種于含有不同濃度尖孢鐮刀菌毒素和自毒物質(zhì)對羥基苯甲酸的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，篩選混合液誘導(dǎo)半致死劑量；
(3)?將草莓葉段接種在混合液半致死劑量愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽；將不定芽接種在含半致死劑量混合液的MS培養(yǎng)基上，繼代培養(yǎng)5代后；再接種于高濃度混合液培養(yǎng)基上繼續(xù)繼代培養(yǎng)5代，篩選再生植株；?
(4)?將再生植株接種在混合液半致死劑量MS繼代培養(yǎng)基上，測定其分化和遺傳穩(wěn)定性；然后將篩選出的再生植株接種于生根培養(yǎng)基中，光照培養(yǎng)60d后移植到花盆中；再用對羥基苯甲酸和病菌孢子懸浮液處理，30d后鑒定突變體發(fā)病情況，得抗性突變體。
2.根據(jù)權(quán)利1所述的方法，其特征在于，以草莓組培苗葉段為誘導(dǎo)材料，愈傷組織最優(yōu)再生體系為MS固體培養(yǎng)基＋麥芽糖(10~30g/L)+TDZ(1~4mg/L)+?AgNO3?1mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利1所述的方法，其特征在于，篩選突變體混合液的半致死濃度為10%毒素＋1.0×10-4molL-1對羥基苯甲酸。
4.根據(jù)權(quán)利1所述的方法，其特征在于，接種在含混合液半致死劑量的MS培養(yǎng)基上的不定芽，繼代培養(yǎng)5代后，再于含混合液濃度高一梯度MS培養(yǎng)基上繼續(xù)繼代培養(yǎng)5代，得誘導(dǎo)再生植株。
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