[發明專利]對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201210021437.4
• 申請日: 2012-01-31
• 公開（公告）號: CN102559484A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 閆冬春;劉鴻玲
• 申請（專利權）人: 魯東大學
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 煙臺雙聯專利事務所(普通合伙) 37225
• 代理人: 矯智蘭

1.?對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測試劑盒，包括盒體（1），盒體（1）內設有管孔支架（5），其特征在于管孔支架（5）上擺放有以下管件：

1）、熒光定量PCR?反應液管（6），內裝2×熒光定量PCR?buffer、對蝦傳染性肌肉壞死病毒正反引物及熒光標記的TaqMan探針的混合液；

正向引物序列：5’-?GATGG?CAGCA?CGTCA?AAATG?-3’?；

反向引物序列：5’-?CAGCT?GTTCC?TGGGA?CTTCC?T?-3’?；

TaqMan探針序列：5’-CTATT?TCCTC?CACTA?ATTCA?GAGC-3’，?探針序列的5’端用FAM?標記，3’端用TAMRA標記；

2）、去離子水管（3），內裝無菌去離子水；

3）、陰性對照管（4），內裝SPF（無特定病原體）對蝦核酸；

4）、標準品管（2），分別內裝傳染性肌肉壞死病毒10⁷,10⁶,?10⁵,?10⁴,?10³,?10²,?10,1拷貝cDNA陽性克隆。

2.權利要求1所述檢測試劑盒用于檢測對蝦傳染性肌肉壞死病毒。

3.采用權利要求1或2所述檢測試劑盒對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測方法，其特征在于：

（1）熒光定量PCR反應體系：

試劑體積/體系(μl)終濃度熒光定量PCR 反應液11.21×real-time PCR buffer, 0.2μM正反引物， 0.4μM探針標準品或模板cDNA1?無菌去離子水7.8?總體積20-

（2）熒光定量PCR反應：

95℃變性30s，1個循環；

95℃變性5s，62℃退火延伸?20s，40個循環。