[發明專利]肺癌標志物SBP-1及其用途

無效

• 申請號: 201210019822.5
• 申請日: 2012-01-20
• 公開（公告）號: CN103217534A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 宋言崢;張舒林;孫戰強
• 申請（專利權）人: 上海市公共衛生臨床中心
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;A61K38/17;A61P35/00;C12N15/12
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明涉及分子生物學和腫瘤藥物領域。具體地說，本發明涉及一種肺癌標志物SBP-1在肺癌診斷中的用途，及SBP-1作為標志物用于肺癌的檢測方法。

背景技術

研究報道，肺癌是目前最常見的惡性腫瘤之一，也是全球發病率和死亡率增加最快的腫瘤。據統計，每年約有120萬患者被診斷為肺癌，110萬人死于肺癌。肺癌依據其組織病理學可分為兩大類：小細胞肺癌和非小細胞肺癌。非小細胞肺癌又包含鱗狀細胞癌、腺癌、大細胞癌等。

迄今為止，全球的肺癌篩查方案尚不成熟。因此，早期篩查和診斷已經成為肺癌防治急需解決的重大科學問題。腫瘤標志物的發現和合理應用是腫瘤早期發現、早期診斷的前提。然而，目前對有關肺癌的發病機制和特性的認識仍然不足，因此，研究者認為，直接從蛋白質整體水平入手研究肺癌的發病機制將有可能尋找出更合適的用于肺癌診斷的分子標志物，這將為肺癌的診斷預防和治療提供關鍵依據。

現有的研究中表明，硒是一種具有抗癌效應的元素，它以無機亞硒酸鹽或有機硒酸鹽的形式存在于植物和其他有機食物中。人類硒基蛋白質組包含35種含硒蛋白質，它們具有廣泛的生理功能。其中，(selenium?binding?protein，SBP-1)是一種細胞溶質蛋白，由Medina等于1990年首次從老鼠的肝臟分離純化出來，該SBP-1為硒元素在體內的蛋白結合物，位于染色體1q21-22，分子量為56KD。因人類SBP與老鼠SP56基因為同系物，所以又稱為hSP56。目前已證實SBP-1在正常肝臟、肺、腎臟、結腸、前列腺、以及胰腺組織中高表達，在胸腺、睪丸、外周血細胞和腦組織中幾乎檢測不到。

迄今，尚未見有關有效地早期篩查和診斷肺癌的可供臨床應用的檢測試劑，尤其是以SBP-1作為標志物用于肺癌的檢測試劑及方法，這將為深入地研究和大規模驗證SBP-1與肺癌的相關性，對癌癥進行診斷以及為個體患者提供輔助治療方案具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供SBP-1的新用途。本發明提供了SBP-1作為肺癌標志物的用途，以及以SBP-1為靶標篩選抑制肺癌細胞侵襲的藥物的應用，為肺癌的診斷和治療提供參考依據。

本發明提供了SBP-1作為肺癌標志物的用途，主要針對小細胞肺癌和非小細胞肺癌；尤其是針對非小細胞肺癌的鱗狀細胞癌、腺癌、大細胞癌等。

相應的，本發明提供了一種肺癌診斷試劑盒，該試劑盒含有SBP-1。較好的，該試劑盒，主要針對小細胞肺癌和非小細胞肺癌的檢測；尤其是針對非小細胞肺癌的鱗狀細胞癌、腺癌、大細胞癌等的檢測。

通常，試劑盒中含有標準劑量的SBP-1蛋白對照品，操作手冊，稀釋液或者緩沖液等。

本發明中，檢測時，通常采用相關抗體等檢測樣本中SBP-1含量。

本發明中，通過SBP-1抗體來檢測SBP-1的存在。

本發明采用比較蛋白質組學方法對肺癌細胞系/組織和正常對照細胞/組織的蛋白質表達譜進行比較分析，質譜鑒定其中部分差異蛋白質點。SBP-1蛋白為其中一個差異點，即其在癌細胞中比正常細胞高表達，且可明顯區分。

采用Real-time?PCR(以下簡稱RT-PCR)和免疫組化的技術，分別檢測肺癌患者及其配對的正常組織中的SBP-1的mRNA和蛋白表達表達水平，發現SBP-1在肺癌組織中表達明顯高于其配對的正常組織。該發現與比較蛋白質組的實驗結果一致，表明SBP-1能夠作為一種肺癌的診斷標志物。

具體檢測時，可以先取待測樣本，然后分析比較待測樣本與正常對照中SBP-1的表達量。

為此，本發明提供了一種采用上述肺癌診斷試劑盒用于檢測肺癌的方法，試劑盒中含有標準劑量的SBP-1蛋白對照品，稀釋液或者緩沖液以及容器或液態芯片和標簽等，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)制備含有標準劑量的SBP-1蛋白對照品，稀釋液或者緩沖液以及容器或液態芯片和標簽的肺癌診斷試劑盒，所述的容器或液態芯片中分別設有：

a、SBP-1蛋白的特異性抗體；

b、PBS緩沖液pH7.2-7.4，或0.01mol檸檬酸鈉緩沖液pH6.0，或3％H2O2溶液，或辣根酶檢測試劑；

(2)制備重組蛋白，擴增SBP-1的核苷酸序列，或用含有該核苷的重組表達載體轉化或轉導至合適的宿主細胞；

(3)在合適的培養基中培養宿主細胞；

(4)從培養基或細胞中分離、純化蛋白質；