[發明專利]肺癌標志物SBP-1及其用途

無效

• 申請號: 201210019822.5
• 申請日: 2012-01-20
• 公開（公告）號: CN103217534A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 宋言崢;張舒林;孫戰強
• 申請（專利權）人: 上海市公共衛生臨床中心
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;A61K38/17;A61P35/00;C12N15/12
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.SBP-1蛋白在制備腫瘤標志物中的用途，其中，所述的腫瘤為肺癌。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的肺癌是小細胞肺癌和非小細胞肺癌，包括鱗狀細胞癌、腺癌和大細胞癌。

3.一種肺癌診斷試劑盒，其特征在于，試劑盒中含有標準劑量的SBP-1蛋白對照品，操作手冊，稀釋液或者緩沖液以及容器或液態芯片和標簽。

4.一種采用權利要求3的肺癌診斷試劑盒檢測肺癌的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)制備含有標準劑量的SBP-1蛋白對照品，稀釋液或者緩沖液以及容器或液態芯片和標簽的肺癌診斷試劑盒，所述的容器或液態芯片中分別設有：

a、SBP-1蛋白的特異性抗體；

b、PBS緩沖液pH7.2-7.4，或0.01mol檸檬酸鈉緩沖液pH6.0，或3％H2O2溶液，或辣根酶檢測試劑；

(2)制備重組蛋白，擴增SBP-1的核苷酸序列，或用含有該核苷的重組表達載體轉化或轉導至合適的宿主細胞；

(3)在合適的培養基中培養宿主細胞；

(4)從培養基或細胞中分離、純化蛋白質；

(5)純化的SBP-1基因產物或者其具有抗原性的片段，誘導產生多克隆抗體；

(6)免疫組化：脫蠟和水化：取5μm的石蠟切片于二甲苯中30min，脫蠟；通過不同的乙醇浸泡至水化；

(7)抗原修復：將切片置于10mM?pH6.0檸檬酸緩沖液(pH6.0)中，微波爐加熱15min；

(8)微波處理后的切片置于檸檬酸緩沖液中15min，用流動水沖洗5min；

(9)將切片放置于3％H2O2室溫孵育15min，消除內源性過氧化物酶的活性；

(10)切片置于1/500稀釋的SBP-1兔多克隆抗體中溫育60min；

(11)免疫組化辣根酶系統DAB底物染色；

(12)切片用蘇木精復染，不同級別的乙醇浸泡至二甲苯，處理切片，鏡檢，以水或緩沖液做陰性對照，以SBP-1過表達標本為陽性對照，完成檢測。

5.如權利要求4方法，其特征在于，所述的步驟(2)中，通過RT-PCR獲得重組蛋白SBP-1的編碼序列，引物分別是：

S100A2-F：5-GGATCC?GAACTTCTGCACAAGG-3’

和S100A2-R：5’-CCGCTCGAGAAAGGCATCAACAGTC-3’，

模板為肺癌組織cDNA。

6.SBP-1在制備抑制肺癌細胞侵襲的藥物的應用。

7.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述的肺癌細胞是小細胞肺癌和非小細胞肺癌細胞。