[發(fā)明專(zhuān)利]沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物在制備防治炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210018080.4
• 申請(qǐng)日: 2012-01-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102861317A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張成崗;徐陽(yáng);吳永紅;李偉光;李軍懷;張艷春;高艷;李志慧
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所;蘇州科景生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K38/16
• 分類(lèi)號(hào): A61K38/16;A61P1/00;A61P1/04;A61P29/00
• 代理公司: 北京尚誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

1.沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白在防治炎癥性腸病藥物研發(fā)中的應(yīng)用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述炎癥性腸病包括潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于：所述沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331是包括Tat蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)肽、沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白自N端第1-176位氨基酸殘基和第402-505位氨基酸殘基的融合蛋白；所述沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白自N端第1-176位氨基酸殘基和第402-505位氨基酸殘基可通過(guò)柔性連接肽連接。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述的應(yīng)用，其特征在于：所述沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白可采用常規(guī)的原核表達(dá)的方法制備得到，純度大于95％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一所述的應(yīng)用，其特征在于：所述沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白按包括以下步驟的方法制備得到：

1)合成沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296編碼基因，其核苷酸序列如序列表中序列1所示；所述沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296是通過(guò)柔性臂將沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白自N端第1-176位氨基酸殘基和自N端第402-505位氨基酸殘基連接得到的；

2)將人工合成的沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296編碼基因克隆到攜帶Tat轉(zhuǎn)導(dǎo)肽編碼序列的原核表達(dá)載體中，得到攜帶Tat蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)肽編碼序列和沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296編碼基因的原核表達(dá)載體；所述N端連接有Tat蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)肽的沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物命名為CZLC331，編碼該蛋白的基因的核苷酸序列如序列表中序列2所示；

3)將重組表達(dá)載體pET28b-Tat-CZLC331轉(zhuǎn)化入宿主菌；

4)誘導(dǎo)表達(dá)含有攜帶Tat蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)肽編碼序列和沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296基因的原核表達(dá)載體的宿主菌；

5)分離及純化表達(dá)的重組蛋白，得到沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于：所述步驟2)中攜帶Tat轉(zhuǎn)導(dǎo)肽編碼序列的原核表達(dá)載體為任意一種可在大腸桿菌中表達(dá)的原核表達(dá)載體，如pET-22b系列、pET-28系列或pET-15系列，優(yōu)選為pET28b-Tat；以pET28b-Tat為出發(fā)載體構(gòu)建的攜帶沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331編碼基因的重組表達(dá)載體為pET28b-Tat-CZLC331；所述步驟3)中的宿主菌為E.coli?BL21(DE3)、E.coli?ER2566(DE3)、E.coli?BL21(DE3，plysS)、E.coli?JM109、E.coli?HB101或E.coli?Top10等，優(yōu)選為E.coli?BL21(DE3)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于：所述藥物可以制成注射液、口服液、灌腸液、膠囊、腸溶片、粉劑或粒劑，優(yōu)選為注射液、灌腸液或腸溶片。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：所述膠囊、腸溶片、粉劑和粒劑等固態(tài)劑型的藥物中活性成分沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白的質(zhì)量百分含量為1-35％；所述注射液、口服液和灌腸液等液態(tài)劑型的藥物中活性成分沙門(mén)氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白的濃度可為2-64g/L；在所述藥物中可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的輔料，包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、潤(rùn)滑劑、穩(wěn)定劑、稀釋劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、稀釋劑、吸附載體、賦形劑，必要時(shí)還可加入色素、甜味劑及香味劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：所述藥物為蛋白注射液，由重量體積比為5％(5g/100mL)的CZLC331蛋白、0.85％(0.85g/100mL)的氯化鈉和注射用水組成。

10.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的應(yīng)用，其特征在于：所述藥物為腸溶片，由CZLC331蛋白100重量份，乳糖60重量份，微晶纖維素20重量份、羧甲基淀粉鈉20重量份、聚維酮K₃₀?10重量份混合制粒，再將干顆粒按重量份2500∶50的比例加入滑石粉混合均勻壓片，再在壓片表邊噴霧涂覆腸溶薄膜衣層制成。