[發明專利]一種人類骨髓、臍帶血或外周血干細胞樣本密度分離液及干細胞分離方法

有效

• 申請號: 201210017987.9
• 申請日: 2012-01-19
• 公開（公告）號: CN102604892A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 唐明淇
• 申請（專利權）人: 唐明淇
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 北京思創畢升專利事務所 11218
• 代理人: 韋慶文

技術領域

本發明涉及生物醫學技術中的人類干細胞分離領域，具體來說，涉及一種人類骨髓、臍帶血或外周血干細胞樣本密度分離液及干細胞分離方法。

背景技術

現有技術中，用于人類血液細胞分離的方法包括免疫磁珠法、流式細胞儀法、血細胞分離機法和培養擴增法等方法。

免疫磁珠法是將已知的抗體包被在磁珠微粒上，使磁珠微粒與人類血液混合。呈抗原抗體陽性的細胞粘附在磁珠上，通過一條磁性管道，磁珠被吸附在管壁上；其它沒有結合磁珠的細胞都流走后，去除管道磁性，搜集所有含有磁珠的細胞。存在問題：造價高，中低收入患者不適用。對細胞本身活性有損傷，影響細胞治療療效。

流式細胞儀法的分選功能是由細胞分選器完成的。其過程是：由噴嘴射出的液柱被分割成一連串的小水滴，根據選定的某個參數由邏輯電路判明是否將被分選，而后由充電電路對選定細胞液滴充電，帶電液滴攜帶細胞通過靜電場而發生偏轉，落入收集器中；其它液體被當作廢液抽吸掉，某些類型的儀器也有采用捕獲管來進行分選的。存在問題，一臺流式細胞儀造價300-500萬元，標記用抗體1500-5000元一支，造價高，標記物有致癌性，應用于臨床不安全，只能適用于科研。

血細胞分離機法主要用于分離外周血，先給患者注射動員劑，然后使患者外周血經過血細胞分離機循環過濾，得到一定范圍直徑的細胞，用于細胞治療。存在問題：打動員劑增加治療負擔，分離后細胞液體積過大，患者承擔一定的生命危險。

培養擴增法是在采集人類血液后，加入試劑置于培養箱擴增，1周后清洗使用。存在問題：污染率高，干細胞向未知方向分化為未知干細胞，時間長。

現有技術中，已經公開的涉及骨髓和血液分離專利文獻包括：

申請號200510130326.7，名稱：一種分離細胞的方法及專用細胞分離液。該分離細胞的方法缺點：上述方法針對雞，牛，人血液需要做各種調整，準確度堪憂，由于添加了表面活性劑，分離出的細胞未知，只能用于簡單的細胞試驗使用。

申請號200610035900.5，名稱：一種干細胞分離液及其用于干細胞分離的方法。該干細胞分離液和干細胞分離的方法的缺點：需要配制工作液，需要調節密度，只能搜集密度在1.083g/ml范圍內的細胞，即搜集到的細胞較雜，而可用于治療所需要的目標細胞數量少，并且對于臍帶血來說，使用該方法去除紅細胞不凈，最終臨床應用的時候會導致患者產生排異反應。

申請號200610114475.9名稱：用于分離骨髓單個核細胞的試劑盒。使用該試劑盒的缺點：使用該試劑盒直接分離血液中的干細胞，數量不足以臨床治療使用，所以該方法進行了細胞培養，培養的細胞污染率高，體外模擬體內環境使細胞擴增，導致培養出的細胞有形態沒功能，不能用于臨床治療。

申請號200610106875.5名稱：一種有核細胞體外分離試劑盒及其應用方法。缺點：此試劑盒及其應用方法所用的HISTOPAGUE1077為密度1.077g/ml的淋巴細胞分離液，經此分離后的細胞絕大多數為淋巴細胞，這樣導致細胞中能夠用于治療的干細胞占少數，影響臨床療效。

申請號200710137781.9名稱：骨髓臍帶血干細胞體外分離試劑盒及其應用方法。缺點：該試劑盒的使用中添加了Lin抗體，導致成本大大提高，投入到臨床使用后，給中低收入患者造成經濟負擔，導致患者看不起病，接受不起細胞治療，并且使用了Lin抗體對細胞清洗造成了較大負擔，此種物質進入人體后會發生何種變化還是未知數。

以上專利文獻公開的試劑盒或其使用方法存在原料來源復雜，配制繁瑣，對于分離哪種血液針對性不強(因為人類血和動物血細胞存在一定差異)，獲得的分離液用與治療難以控制等缺點。

因此，以上僅適用于實驗，現今臨床治療應用較多的提取干細胞得方法大致有3種：

1：過篩方法，例如血細胞分離機，是將血液直接過篩，篩選細胞體積較大的細胞用于治療，其中包含部分紅細胞，部分干細胞，部分白細胞，部分淋巴細胞等，體積較大約在50ml-150ml左右，直接注入人體治療心臟無法承受；

2：標記法：用抗體對所需要細胞進行標記，然后再洗脫標記物，用于治療，對于未知的標記物致癌性有待研究；