[發明專利]一種快速篩檢動物食品樣中抗菌藥物殘留的檢測方法

有效

• 申請號: 201210014205.6
• 申請日: 2012-01-06
• 公開（公告）號: CN102590196B
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發明（設計）人: 杜季梅;劉佳明;孫晶;胡瑜
• 申請（專利權）人: 溫州醫學院
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及抗菌藥物殘留檢測分析技術領域，具體地說屬于一種利用細菌的生長受到被檢樣品中抗菌藥物抑制而快速篩檢食品樣品中青霉素藥物殘留的檢測方法。

背景技術

抗菌藥物殘留一直是困擾食品安全的嚴重問題。青霉素類藥物是一類重要的β-內酰胺類抗生素，因其高效、低毒是目前獸醫學臨床上應用最受青睞的藥物之一由于該類藥物的廣泛使用，使其在動物源性食品上的殘留現象越來越嚴重，雖然青霉素類藥物本身對機體沒有很強毒性，但容易引起藥物過敏反應，是各類過敏藥物之最同時，若長期食用低濃度該類抗生素，會使細菌產生耐藥性，菌群失調，導致人體免疫力降低此外，還給動物源性食品生產加工帶來不可估計的損失因此，建立針對青霉素類藥物殘留的快檢測方法，開發價格適中的試劑盒產品對控制動物源性食品衛生質量、保障消費者健康、保證工業生產等具有重要的社會經濟意義。

目前，針對食品抗菌素殘留一般有氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、分光光度計、化學發光法、酶抑制法、毛細管電泳技術(CE)等。用上述方法檢測存在儀器設備復雜、樣本前處理和測定操作繁瑣的缺陷，設備成本大，檢測費用高，對檢測人員的要求也高，不適合大量樣本篩檢，不利于在基 層食品檢測部門推廣應用。開發一種操作方便、費用低、可靠、可用大量檢測樣品中青霉素藥物殘留的檢測方法勢在必行。

微生物檢測法是根據抗菌物質對微生物的生理機能及代謝的抑制作用來定性或定量確定樣品中的抗菌物質殘留，具有快速、敏感、廉價等優點。通常在被檢測樣中培養對抗生素敏感的微生物，如果樣品中沒有抗生素存在，由于微生物的生長可以觀察到培養基變混濁、不透明或由于微生物產酸導致指示劑顏色變化；如果有抗生素或其他抑菌物質存在則會觀察到培養基上有抑菌圈形成或培養基仍舊透明，或沒有顏色變化。目前，牛奶等液體樣的抗菌藥物殘留微生物檢測法主要有氯化三苯基四氮哇法，并已列入國家標準。但該方法的具體操作過程中，干擾因素多；待檢的食品樣品往往帶有固有微生物或外來微生物，不能保證待檢樣品無菌狀態，這些微生物的存在會嚴重影響微生物檢測法。

比如剛采集的生牛乳含有細菌，在溫度適宜的條件下，細菌繁殖很快，而且菌相出現交替演變的現象。一般剛采集的生牛乳的pH是中性，含有豐富的乳糖，有利于生牛乳中自然存在的乳酸細菌，例如乳鏈球菌(Streptococcus lactis)很快地繁殖。它們發酵乳糖產生乳酸，使牛乳的pH降低，并引起蛋白質凝結成乳酪狀。低pH最終也抑制了乳鏈球菌的繁殖，被能耐受更低pH的的菌種乳桿菌(Lactobacillus)所代替，它們完成乳糖發酵，并使pH更加降低。在這種低pH條件下酵母菌利用乳酸而生長。隨著乳糖和乳酸的減少，pH再度上升，大部分假單孢菌(Pseudomonas)和芽孢桿菌(Bacillus)生長繁殖。

待檢的食品樣品還不能采用滅菌的方法，因為這樣會影響食品品質；無菌技術，是微生物學的基本要求，這樣的現實情況就給才用微生物檢測法檢測法帶來很大問題：這些干擾微生物來源不清，種類繁多，嚴重影響檢測細菌的生長(抑制或促進檢測微生物的生長)，或者干擾微生物大量繁殖影響到酸堿指 示劑的指示結果，對檢測結果影響很大，會產生假陰性或假陽性結果。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術在推廣使用過程中存在的上述缺陷，提供一種不需要特定大型分析儀器設備，具有靈敏度高、可信度高、使用方法簡單的篩檢方法，使其能有效降低牛奶等動物食品樣品中固有微生物等雜菌干擾，減少產生假陰性或假陽性結果。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

為解決上述技術問題，本發明提供一株對青霉素藥物敏感性高并應用于青霉素藥物檢測的短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)LJM-006 CGMCC No.5418。

本發明的短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)LJM-006，于2011年10月28日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其簡稱為CGMCC(地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，郵編100101)保藏，分類命名為短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)，保藏編號為CGMCC No.5418。

本發明的短雙歧桿菌LJM-006分離于一名浙江省健康青年人糞便中。

本發明的短雙歧桿菌LJM-006菌株具有下述微生物學特征：

(1)菌落形態：LJM-006菌株在平板上菌落呈灰白色或乳白色，不透明、有光澤、表面光滑、凸起、質地軟、邊緣整齊，直徑1-1.5mm。