[發明專利]重組人硫氧還蛋白的制備方法無效
| 申請號： | 201210014016.9 | 申請日： | 2012-01-18 |
| 公開（公告）號： | CN102586201A | 公開（公告）日： | 2012-07-18 |
| 發明（設計）人： | 陶凌;屈延;孫璐;郭云萍;高超;張立劍 | 申請（專利權）人： | 陶凌 |
| 主分類號： | C12N9/02 | 分類號： | C12N9/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京鼎佳達知識產權代理事務所(普通合伙) 11348 | 代理人： | 蔣常雪 |
| 地址： | 710032 陜西省西安市長*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重組 硫氧還蛋白 制備 方法 | ||
1.一種重組人硫氧還蛋白(rhTrx)的制備方法，其特征在于，該制備方法包含以下步驟：
1)誘導培養重組菌，離心獲得菌體；
2)裂菌，離心，收集上清；
3)上清上樣于陰離子交換層析柱，收集目的蛋白所在洗脫峰，得到一次純化產物；
4)將得到的一次純化產物上樣于陽離子交換層析柱，收集目的蛋白所在洗脫峰，得到重組人硫氧還蛋白；
最終獲得純度達95％以上的重組人硫氧還蛋白。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中，當培養至OD600nm達到6-8時，加入終濃度為1mM的IPTG作為誘導劑。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中，所述菌為大腸桿菌BL21(DE3)。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中，加入裂菌緩沖液進行裂菌，菌體和裂菌緩沖液的比例為1g菌體加10ml裂菌緩沖液，所述裂菌緩沖液為STE裂菌緩沖液，該裂菌緩沖液由100mM?NaCl、1mM?EDTA、pH?8.0的50mM?Tris-HCl組成。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3)中，所述陰離子交換層析柱為DEAE?Sepharose?Fast?Flow層析柱。
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟4)中，所述陽離子交換層析柱為SP?Sepharose?Fast?Flow層析柱。
7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3)中，所述陰離子交換層析柱使用的洗脫緩沖液由20mM?Tris-HCl，1mM?EDTA，1M?NaCl，pH8.0組成。
8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3)中，收集目的蛋白所在洗脫峰后，再加150倍體積的透析液，分3次透析，所用透析液由20mM檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，1mM?EDTA，pH?4.0組成。
9.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟4)中，所述陽離子交換層析柱使用的洗脫緩沖液由20mM檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，1M?NaCl，1mM?EDTA，pH?4.0組成。
10.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟4)中，收集目的蛋白所在洗脫峰后，再加150倍體積的PBS，分3次透析。
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