[發明專利]人血白蛋白的制備方法

無效

• 申請號: 201210013227.0
• 申請日: 2012-01-16
• 公開（公告）號: CN102532304A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 田健生;徐健生;王玉兵
• 申請（專利權）人: 武漢中原瑞德生物制品有限責任公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種生物制品技術中蛋白質的分離、提取方法，具體涉及人血白蛋白的制備方法。

背景技術

人血漿白蛋白(HPA)是有585個氨基酸組成的單鏈非糖蛋白，分子量為66KD，是血漿中含量最多的一種蛋白質，在人體內HPA主要生理功能是維持血液滲透壓和攜帶血液中多種配基(包括脂肪酸、氨基酸、類固醇、金屬離子及藥物)與組織進行交換等生理功能，臨床上主要用于手術輸血和危重病人補液，治療創傷休克、發燒、水腫、低白蛋白血癥和紅細胞過多癥等，而且能增強人體抵抗能力，是重要的臨床藥物，也是迄今為止產量最大、用量最大的蛋白質藥物。當前，HPA的臨床使用量巨大，國際上年使用量約達600噸，我國臨床使用量也已達100噸左右，并將隨著農村生活水平和醫療條件的改善不斷增加。

現有技術中多采用低溫乙醇工藝分離血漿蛋白，分離各組分多采用離心分離的方法，它存在如下缺點：一是離心剪切力對蛋白質的影響，離心分離轉速每分鐘一般在14000轉以上，超高速剪切力對蛋白質沉淀顆粒造成的破壞，可能造成蛋白質立體結構的變化；二是離心分離采用超高速離心，一般達到14000轉以上，機器產熱需要接近-30℃以下的工藝冷媒在離心機轉鼓周圍提供冷環境，以降低轉鼓超高速旋轉產生的熱量，防止蛋白受熱而變性。同時離心操作間溫度也要求-5℃以下，加上離心機本身的高耗電(3KW/臺)，整體上能耗特別大，而且要求低溫的操作條件；三是離心操作由于單臺離心機轉鼓容量有限，需要多臺設備同時開啟，不易進行管道自動化，人員勞動強度大，安全風險高，制品“跑、冒、滴、漏”不可避免，此法產品收率一般在2.5g/ml血漿以下，產品收率低。

另一種較為改進的方法是，采用加壓過濾分離方法，但是在過濾之前，反應混懸液中必須加入足夠量的硅藻土或珍珠巖的助濾劑，才能保證過濾的實現。而硅藻土或珍珠巖等助濾劑中主要成分是二氧化硅，占70～80％，其次要成分就是三氧化二鋁，約占10～20％不等，這些三氧化二鋁經過蛋白反應溶液后會有一定比例的鋁離子形式存在進入制品溶液。從所周知，鋁離子對人體有致癌作用，國家藥品標準規定有關人血白蛋白質量標準都有明確的規定，必須小于200微克/升。另一方面，加壓過濾所用的深層濾板，其主要成分是纖維素纖維、硅藻土、珍珠巖等，也同樣有鋁離子釋放進入制品中；并且還存在超濾透析注射用水體積大的缺陷：為了去除生產過程中引入的鋁離子，在生產過程的超濾工序中，至少需要首次濃縮液10倍以上的注射用水進行反復透析，才有可能使制品中鋁離子小于200微克/升，而且即便是再增加透析倍數，鋁離子也始終會大于100微克/升。

發明內容

本發明的目的是為了克服上述現有技術存在的缺陷，而提供一種人血白蛋白的制備方法，其技術方案如下：

人血白蛋白的制備方法，包括以下步驟：

第一步，分離組分I+II+III：以人血漿為原料，加壓過濾分離人血漿，分離組分I+II+III沉淀，收集壓濾上清液進入下一步工序；

第二步，分離組分IV：將上一步收集的壓濾上清液，采用加壓過濾分離組分IV沉淀，收集壓濾上清液進入下一步工序；

第三步：分離組分V：將上一步收集的壓濾上清液，采用加壓過濾分離組分V，收集壓濾分離組分V沉淀進入下一步工序；

第四步：精制純化，將上一工序收集的組分V沉淀的pH調節至4.5～4.6，調控溫度至-2～-3℃，靜置4小時以上，深層過濾，收集過濾液進入下一工序；

第五步，超濾：將上一工序深層過濾液的pH調節至4.0～4.5，再濃縮深層過濾液至蛋白質含量22％以上，收集超濃縮液進入下一步工序；

第六步，巴氏滅活：將上一步超濾濃縮液調pH?6.8～7.0，添加辛酸鈉，至每克蛋白質中添加0.14～0.18克辛酸鈉，60±0.5℃水浴保溫10小時。

第七步，除菌灌裝，檢定成品，將檢定合格后產品貼簽、裝盒等進行包裝。

上述技術方案的第一步中分離組分I+II+III具體步驟是，將低溫冰凍人血漿融化為液體狀態，加入體積份數為95％的-15℃的藥用乙醇，至最終乙醇的體積達到人血漿和藥用乙醇混合液總體積的20％，同時用pH為4.0的緩沖液調節人血漿和藥用乙醇混合液的pH至6.2～6.4，并調節血漿蛋白質使其質量分數達到5.0％，調控溫度至-5℃，攪拌2小時以上，靜置4小時以上后，往混合液中按20g/L加入硅藻土或珍珠巖或二者組合作為助濾劑，采用加壓過濾分離方法分離組分I+II+III沉淀。