[發(fā)明專利]一種豬瘟病毒S31基因的原核表達蛋白及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210013180.8
• 申請日: 2012-01-17
• 公開（公告）號: CN102532282A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設計）人: 毛立;李文良;江杰元
• 申請（專利權）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學院
• 主分類號: C07K14/18
• 分類號: C07K14/18;C12N15/40;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

技術領域

本發(fā)明涉及的是一種豬瘟病毒S31基因的原核表達蛋白及其制備方法，屬于生物技術領域。

背景技術

豬瘟（Classical?Swine?Fever）是豬的一種高度接觸性的致死性傳染病。其病原體豬瘟病毒（Classical?Swine?Fever?Virus）是黃病毒科瘟病毒屬中的成員，為有囊膜的單股正鏈RNA病毒。S31蛋白是對病毒非結構蛋白進行加工的絲氨酸蛋白酶，在病毒蛋白加工成熟中具有重要作用。而現(xiàn)今對病毒S31蛋白的作用、抗原性等都沒有進行深入研究。在現(xiàn)有的所建立的檢測豬瘟抗體的間接ELISA?中，用于檢測的抗原多為結構蛋白，如E0、E2蛋白，而S31蛋白作為抗原的檢測方法還未有涉及。大腸桿菌表達系統(tǒng)是目前比較成熟的表達系統(tǒng)，具有操作簡單，安全無毒，外源蛋白表達量高等優(yōu)點，已經(jīng)成功用于多種蛋白的生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

技術問題

本發(fā)明的目的是針對目前尚未有有關CSFV?S31蛋白相關的基因工程制品的現(xiàn)狀，提供一種準確可靠的CSFV?S31蛋白的基因工程制品的制備方法，具體的說是一種鑒定豬瘟病毒抗體的S31基因序列原核表達蛋白抗原及其制備方法。

技術方案

本發(fā)明的目的通過如下技術方案實現(xiàn)：

一種重組大腸桿菌表達的豬瘟病毒S31蛋白，該蛋白系將S31基因片段克隆入原核表達載體pET32a得到重組表達載體，將該重組表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)?獲得重組大腸桿菌BL21(DE3)，將該重組大腸桿菌BL21(DE3)培養(yǎng)至OD600達0.6-0.8時加入終濃度為0.5mM的IPTG進行誘導表達，分離菌體蛋白經(jīng)Ni親和層析柱純化獲得。

所述S31氨基酸序列為SEQ?ID?NO.1，即豬瘟病毒多聚蛋白的第1591-1816位氨基酸殘基。

PAVCKKVTEHEKCTTSMMDKLTAFFGVMPRGTTPRAPVRFPTSLLKIRRGLETGWAYTHQGGISSVDHVTCGKDLLVCDTMGRTRVVCQSNNKMTDESEYGVKTDSGCPEGARCYVFNPEAVDISGTKGAMVHLQKTGGEFTCVTASGTPAFFDLKNLKGWSGLPIFEASSGRVVGRVKVGKNEDSKPTKLMSGIQTVSKSTTDLTEMVKKITTMSRGEFRQITLA

其核苷酸序列為SEQ?ID?NO.2，即豬瘟病毒堿基序列的第5145-5822位堿基。

CCTGCCGTTTGCAAGAAGGTCACTGAACATGAGAAATGTACCACATCCATGATGGACAAATTGACTGCTTTTTTCGGTGTTATGCCGAGGGGCACCACACCTAGAGCCCCTGTGAGATTCCCTACCTCTCTCTTAAAGATAAGAAGGGGTTTGGAAACTGGCTGGGCGTACACACACCAAGGTGGCATCAGTTCAGTGGACCATGTCACTTGTGGAAAAGACTTACTGGTATGTGACACTATGGGCCGGACAAGGGTTGTTTGCCAGTCAAATAATAAGATGACAGATGAGTCCGAGTATGGAGTTAAAACTGATTCCGGATGCCCGGAAGGAGCTAGGTGTTATGTGTTCAACCCAGAGGCAGTTGACATATCAGGGACTAAAGGAGCCATGGTCCACTTACAAAAAACTGGAGGAGAATTCACCTGTGTGACAGCATCAGGAACTCCGGCTTTCTTTGATCTTAAAAACCTTAAAGGCTGGTCAGGGCTACCGATATTTGAGGCATCAAGTGGAAGGGTAGTCGGCAGGGTCAAGGTCGGTAAGAATGAGGACTCTAAACCAACCAAGCTTATGAGTGGAATACAAACAGTTTCCAAAAGTACCACAGACTTGACAGAAATGGTAAAGAAAATAACGACCATGAGCAGGGGAGAATTCAGACAAATAACCCTTGCT

所述的原核表達載體為pET32a。

本發(fā)明所述的重組大腸桿菌表達的豬瘟病毒S31蛋白的制備方法，包括如下步驟：