[發明專利]一種豬瘟病毒S31基因的原核表達蛋白及其制備方法

無效

• 申請號: 201210013180.8
• 申請日: 2012-01-17
• 公開（公告）號: CN102532282A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 毛立;李文良;江杰元
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C07K14/18
• 分類號: C07K14/18;C12N15/40;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

1.一種重組大腸桿菌表達的豬瘟病毒S31蛋白，該蛋白系將S31基因片段克隆入原核表達載體pET32a得到重組表達載體，將該重組表達載體轉化大腸桿菌BL21(DE3)獲得?重組大腸桿菌BL21(DE3)，將該重組大腸桿菌BL21(DE3)培養至OD600達0.6-0.8時加入終濃度為0.5mM的IPTG進行誘導表達，分離菌體蛋白經Ni親和層析柱純化獲得，所述S31蛋白氨基酸序列為SEQ?ID?NO.1，即豬瘟病毒多聚蛋白的第1591-1816位氨基酸殘基，其編碼S31蛋白的S31基因核苷酸序列為SEQ?ID?NO.2，即豬瘟病毒堿基序列的第5145-5822位堿基。

2.權利要求1所述重組大腸桿菌表達的豬瘟病毒S31蛋白的制備方法，包括如下步驟：

（1）根據CSFV?S31基因序列設計引物

F:?CACC?GGATCC??CCT?GCC?GTT?TGC?AAG?AAG?GT

R:?CTCGAG?CTA?TGCA?AGG?GTT?ATT?TGT?CTG?AAT?TC

從CSFV?HCLV毒株中提取RNA，經RT-PCR擴增得到編碼目的基因片段SEQ?ID?NO.2，通過BamH?Ⅰ和?XhoⅠ兩個酶切位點，把所述的基因片段克隆入原核表達載體pET32a中，然后通過酶切和測序鑒定，獲得陽性重組質粒；

（2）將步驟（1）所述的經序列測定正確的重組質粒轉化大腸桿菌BL21（DE3），得到重組表達菌株BL21-△S31；

（3）培養所述的重組表達菌株BL21-△S31，加入IPTG?進行誘導表達，經過豬瘟陽性血清鑒定，該重組蛋白在重組表達菌株包涵體內，經純化獲得所述的重組蛋白。