[發(fā)明專利]一種提高納豆芽孢桿菌抗菌性能的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210012078.6
• 申請日: 2012-01-14
• 公開（公告）號: CN102533719A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃純純;陳建軍;張巧央;柴央央;蔣王輝;葛永達
• 申請（專利權(quán)）人: 臺州職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N15/01;C12R1/07
• 代理公司: 臺州市方圓專利事務(wù)所 33107
• 代理人: 蔡正保;張智平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種納豆芽孢桿菌，尤其涉及一種提高納豆芽孢桿菌抗菌性能的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

納豆芽孢子桿菌是1905年東京大學(xué)的澤村教授(Sawamura)從納豆中首次發(fā)現(xiàn)并分離出來的，并將該菌株命名為Bacillus?natto?Sawamura。此后于1946年經(jīng)美國Smith等人的研究，認(rèn)為納豆芽孢桿菌應(yīng)屬于枯草桿菌的亞種，因此，此后，在分類上將納豆菌歸屬于枯草桿菌。但由于納豆菌的維生素要求性或以γ-聚谷氨酸為主要成分的粘質(zhì)物生產(chǎn)特性，以及噬菌體的感染特異性顯然與枯草桿菌不同，故還是將納豆菌與枯草桿菌區(qū)別，使用納豆芽孢桿菌(Bacillus?subtilis?natto或Bacillus?natto)的名稱。

納豆芽孢桿菌能夠產(chǎn)生多種酶，能分解脂肪、碳水化合物、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，從而使用于發(fā)酵時發(fā)酵產(chǎn)品中含有豐富的寡聚糖、有機酸、氨基酸等多種容易被人體吸收的成分。因此，具有較高的營養(yǎng)保健等功效。納豆芽孢桿菌還具有抗菌活性的作用，納豆芽孢桿菌抗菌代謝產(chǎn)物對人體或畜牧均無毒副作用，因此，可作為天然的防腐劑來開發(fā)應(yīng)用。如將它運用在食品添加劑方面，其作用可相當(dāng)于防腐劑，由于其無毒無副作用，特別適合廣大消費者對天然食品防腐劑這一特點的要求。雖然納豆芽孢桿菌具有較多的優(yōu)點，但是由于其抗菌性能存在效果不佳的缺陷，在應(yīng)用上存在一定的限制性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對以上現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，提供一種提高納豆芽孢桿菌抗菌性能的方法，該方法具有提高納豆芽孢桿菌抗菌性能的目的。

本發(fā)明的目的之一是通過下列技術(shù)方案來實現(xiàn)的：一種提高納豆芽孢桿菌抗菌性能的方法，該方法包括以下步驟：

A、活化：將納豆芽孢桿菌菌種接種到斜面培養(yǎng)基上進行活化培養(yǎng)，從斜面上刮取活化后的納豆芽孢桿菌，用無菌生理鹽水配制成菌懸液；

B、復(fù)合誘變：取上述菌懸液與8-Mop混合制成含8-Mop的菌懸液，振搖，放入無菌平皿內(nèi)，進行長波紫外線輻照，然后將上述經(jīng)過長波紫外線輻照后的含8-Mop的菌懸液稀釋后，涂布于平板培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，生長成熟后，挑選正常型單菌落接種到斜面培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，在培養(yǎng)溫度為25℃～35℃的條件下培養(yǎng)40～60小時，得到誘變后的納豆芽孢桿菌菌體；

C、種子培養(yǎng)：將上述步驟B中誘變后的納豆芽孢桿菌菌體接種到液體種子培養(yǎng)基進行搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25℃～35℃，培養(yǎng)時間為24～48小時，培養(yǎng)結(jié)束后得到種子液；

D、發(fā)酵培養(yǎng)：將上述步驟C中得到的種子液接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進行搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為28～35℃，培養(yǎng)時間為36～60小時，培養(yǎng)結(jié)束后得到發(fā)酵液；

E、提取、篩選：將上述的發(fā)酵液進行離心分離，提取上清液，對上清液進行檢測分析，篩選得到高抗菌性能的納豆芽孢桿菌。

本發(fā)明的上述一種提高納豆芽孢桿菌抗菌性能的方法中所述的納豆芽孢桿菌的保藏編號為：CGMCC?1.1086。所述的斜面培養(yǎng)基及平板培養(yǎng)基都是采用本領(lǐng)域常規(guī)的培養(yǎng)基，所述的斜面培養(yǎng)基及平板培養(yǎng)基均為普通營養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基。所述的普通營養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基中含有以下組份的質(zhì)量含量：蛋白胨：10.0g/L；牛肉膏粉：3.0g/L；氯化鈉：5.0g/L；瓊脂：14.0g/L；pH值為7.2±0.2；其余為蒸餾水。上述所述的液體種子培養(yǎng)基為LB液體培養(yǎng)基。所述的LB液體培養(yǎng)基中含有以下組份的質(zhì)量含量：胰蛋白胨：10g/L；酵母提取物：5g/L；氯化鈉：10g/L；調(diào)節(jié)pH值為7.0，其余為蒸餾水。利用本發(fā)明的方法對納豆芽孢桿菌進行誘變培養(yǎng)后，并通過對誘變后的納豆芽孢桿菌進行篩選，通過對其代謝產(chǎn)物的抗菌性能進行檢測分析，確定具有高抑菌性能的誘變后的納豆芽孢桿菌，上述步驟C至步驟E實質(zhì)上是對誘變后的納豆芽孢桿菌的篩選，通過篩選后得到誘變后的納豆芽孢桿菌具有更高的抗菌性能，有利于提高其在產(chǎn)業(yè)上的應(yīng)用。

上述的一種提高納豆芽孢桿菌抗菌性能的方法步驟A中所述的菌懸液的濃度為10⁷～10⁸個細(xì)胞/mL。