[發明專利]一種用OMC685-1細胞分離培養呼吸道合胞病毒的方法

無效

• 申請號: 201210012069.7
• 申請日: 2012-01-16
• 公開（公告）號: CN102559608A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 敖弟書;吳中明;彭志元;唐君;肖福峰
• 申請（專利權）人: 遵義醫學院
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;G01N33/569
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 吳無懼

1.一種用OMC685-1細胞分離培養呼吸道合胞病毒的方法，其特征在于：用OMC685-1細胞做呼吸道合胞病毒分離工具，倒置顯微鏡觀察細胞病變效應，再用間接免疫熒光法確認病毒。

2.根據權利要求1所述的一種用OMC685-1細胞分離培養呼吸道合胞病毒的方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）培養OMC685-1細胞：OMC685-1細胞復蘇后接種于含10%小牛血清的RPMI-1640培養液中，置于相對濕度為95﹪～98﹪，37℃，5﹪CO₂及37℃條件下培養；每2～3d換液1次，4～5d傳代1次；將生長良好的細胞用0.25﹪胰酶消化后制成細胞懸液，以1×10⁵個/孔的密度接種于96孔培養板，0.1?ml/孔，置于37℃、5﹪CO₂培養箱中培養，待細胞貼壁后感染病毒；

（2）感染OMC685-1細胞，用PBS反復沖洗96孔培養板三次，吸干孔內剩余PBS液，每孔接種40ul含呼吸道合胞病毒的標本，對照孔接種PBS液40ul，感染1-2h后用無血清RPMI-1640培養液沖洗96孔培養板三次，吸干孔內剩余液體，每孔加入0.1ml維持液，含2%小牛血清的RPMI-1640培養液，每4-12h倒置顯微鏡下觀察一次是否出現細胞病變效應；

（3）收集感染細胞做間接免疫熒光法檢測確認病毒。