[發明專利]一株產瓜氨酸的菌株及用該菌株生物合成瓜氨酸的方法

無效

• 申請號: 201210012037.7
• 申請日: 2012-01-16
• 公開（公告）號: CN102433290A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 張濤;江波;王瑩;繆銘;沐萬孟
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P13/10;C12R1/46
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一株產瓜氨酸的菌株，其分類命名為糞腸球菌（Enterococcus?faecalis）SK23.001，已保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：M?2011465。

2.一種用權利要求1所述CCTCC?NO：M?2011465菌株生物合成瓜氨酸的方法，其特征在于，以CCTCC?NO：M?2011465為出發菌株，通過發酵生產瓜氨酸或通過發酵獲得具有精氨酸脫亞氨酶活的靜息細胞，然后作用于精氨酸轉化合成瓜氨酸，步驟如下：

（1）種子培養

種子培養基：L-Arg?1-20g/L，酵母膏1-20g/L，蛋白胨1-20g/L，葡萄糖5-100g/L，無機氮源1.0-10.0g/L，調pH4.0-7.5，去離子水配制；

種子培養條件：CCTCC?NO：M?2011465菌株于30-37℃、100-300rpm的振蕩速度下在種子培養基中培養5-30h活化該菌株；

（2）發酵培養

發酵培養基：L-Arg?1-100g/L，酵母膏1-20g/L，蛋白胨1-20g/L，葡萄糖5-100g/L，無機氮源1.0-10.0g/L，調pH4.0-7.5，去離子水配制；

發酵條件：接種量1%-10%，30-37℃、轉速180-500rpm的條件下在發酵培養基中發酵5-72h，獲得具有酶活的發酵液及濕菌體；

（3）發酵后處理

發酵液經冷凍離心后收集上清液獲得含瓜氨酸的發酵液及含精氨酸脫亞氨酶濕菌體，菌體用0.1%的生理鹽水和pH6.0的0.1mol/L醋酸鹽緩沖液清洗菌體，得靜息細胞用于進行全細胞轉化反應，經檢測轉化率在80%以上；

（4）靜息細胞將精氨酸轉化生產瓜氨酸：底物精氨酸濃度10-200g/L，靜息細胞量0.1-10g/L，在pH4.0-8.0、轉化反應溫度為30-70℃、轉化反應時間1-60h的條件下轉化制得瓜氨酸；

（5）瓜氨酸的分離純化

將發酵液或轉化后的反應液經脫色后利用強酸性陽離子交換樹脂D001，進行瓜氨酸分離純化。