[發(fā)明專利]由間接競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間分辨熒光免疫分析體系檢測(cè)煙草中菌核凈殘留的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210011642.2
• 申請(qǐng)日: 2012-01-13
• 公開（公告）號(hào): CN102590499A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉媛;劉賢金;張霄;王冬蘭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 孫忠浩

1.一種由間接競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間分辨熒光免疫分析體系檢測(cè)煙草中菌核凈殘留的方法，其特征在于：

所述的檢測(cè)體系中，以菌核凈-OVA作為包被抗原，以菌核凈多克隆抗體作為識(shí)別抗體，以Eu-N1標(biāo)記的羊抗兔IgG作為二抗，建立與菌核凈農(nóng)藥對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)抑制曲線，方法是：將菌核凈-卵清蛋白OVA連接物作為包被抗原固定于酶標(biāo)板，再加入梯度稀釋的菌核凈標(biāo)準(zhǔn)品和菌核凈多克隆抗體，讓菌核凈標(biāo)準(zhǔn)品與包被抗原共同競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體，再采用Eu-N1標(biāo)記的羊抗兔IgG作為二抗，通過時(shí)間分辨檢測(cè)模式讀數(shù)后，繪制菌核凈時(shí)間分辨免疫分析的標(biāo)準(zhǔn)抑制曲線，建立線性回歸方程，計(jì)算抑制中濃度，確定最低檢測(cè)限和線性檢測(cè)范圍；

所述的檢測(cè)煙草中菌核凈殘留是指：對(duì)煙草樣品前處理后，通過檢測(cè)體系對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，判斷與樣品對(duì)應(yīng)的煙草中菌核凈殘留量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的由間接競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間分辨熒光免疫分析體系檢測(cè)煙草中菌核凈殘留的方法，其特征在于：所述的Eu-N1標(biāo)記的羊抗兔IgG是這樣獲得的：稱取4?mg?Eu-N1,?用350?μL蒸餾水溶解，備用；將1?mg親和純化后的羊抗兔IgG溶于150?μL蒸餾水，加入pH?9.8的15?μL?0.5?mol/L碳酸鹽緩沖液，混合均勻后，將溶解的Eu-N1與羊抗兔IgG混合，4℃靜置過夜，次日將過夜的反應(yīng)物裝入截留分子量為8000Da的透析袋中，對(duì)超純水透析3?天，截留物為Eu-N1標(biāo)記的羊抗兔IgG，于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3.根據(jù)權(quán)利要求1~2之一所述的由間接競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間分辨熒光免疫分析體系檢測(cè)煙草中菌核凈殘留的方法，其特征在于：對(duì)煙草樣品前處理是指：將煙草樣品粉碎后，稱取1g放入100mL三角瓶中，加20mL丙酮混合均勻，?180rpm振蕩提取1小時(shí)，抽濾后濃縮近干，再用10ml丙酮復(fù)溶殘余物并定容，取100μL丙酮復(fù)溶物，用檢測(cè)緩沖液稀釋10倍后，直接用于CI-TRFIA檢測(cè)。