[發明專利]一種從膠原蛋白制備RGD活性多肽的方法

無效

• 申請號: 201210010561.0
• 申請日: 2012-01-14
• 公開（公告）號: CN102533917A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 劉濤;朱家勇;金小寶;尹輝
• 申請（專利權）人: 廣東藥學院
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/20;C07K14/78;A61K38/39;A61K8/64;A61K49/00;A61P35/00;A61P7/02;A61Q19/00;A23L1/29
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.一種從膠原蛋白制備RGD活性多肽的方法，其特征在于步驟如下：

（1）將膠原蛋白溶于水，調節pH值為7.0~9.0；

（2）酶解：在膠原蛋白水溶液中加入胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或胃蛋白酶，加入量為膠原蛋白質量的1/5000~5/100，?30~45℃條件下酶解，酶解時間為0.5~8小時，用2,4,6-三硝基苯磺酸衍生-分光光度法測定酶解液吸光度，當吸光度不再增長時視為酶解完成，升高溫度到55~65℃保溫10~30分鐘使胰蛋白酶失活，終止反應，得到膠原蛋白酶解液；

（3）過濾：在15~60℃溫度范圍內，采用截留分子量為3,000~20,000道爾頓的濾膜過濾或采用凝膠過濾色譜法過濾，收集濾液得到膠原蛋白多肽溶液；

（4）將膠原蛋白多肽溶液依次通過親和色譜柱和反相色譜柱，收集洗脫液，冷凍干燥，所得粉末即為RGD活性多肽。

2.根據權利要求1所述從膠原蛋白制備RGD活性多肽的方法，其特征在于步驟（2）所述膠原蛋白為動物源未降解的完整膠原蛋白，或者經過酸法、堿法、酶法處理過的膠原蛋白，或直接采用明膠。

3.根據權利要求1所述從膠原蛋白制備RGD活性多肽的方法，其特征在于步驟（2）在膠原蛋白水溶液中加入胰蛋白酶，胰蛋白酶比活為1,000-5,000?U/mg。

4.根據權利要求1所述從膠原蛋白制備RGD活性多肽的方法，其特征在于步驟（3）濾膜截留分子量為5,000道爾頓。

5.根據權利要求1所述從膠原蛋白制備RGD活性多肽的方法，其特征在于步驟（3）凝膠過濾色譜法用到的凝膠過濾色譜柱有效分離范圍為3,000~100,000道爾頓。

6.根據權利要求1所述從膠原蛋白制備RGD活性多肽的方法，其特征在于步驟（4）所述親和色譜柱是以整合素作為配基的。

7.權利要求1~6任意一項所述方法制備得到的RGD活性多肽。

8.權利要求7所述RGD活性多肽在制備RGD活性多肽藥物、RGD活性多肽食品或RGD活性多肽化妝品中的應用。