[發(fā)明專利]一種疫苗佐劑CCL28及制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210009575.0
• 申請日: 2012-01-13
• 公開（公告）號: CN102559693A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡勤學;胡凱;羅素坤
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院武漢病毒研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C07K14/47;A61K39/39
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種分離的基因，其序列為SEQ?ID?1所示的核苷酸序列。

2.一種表達并純化的蛋白質(zhì)，其序列為SEQ?ID?2所示的氨基酸序列。

3.一種分離的基因，其序列為SEQ?ID?3所示的核苷酸序列。

4.一種表達并純化的蛋白質(zhì)，其序列為SEQ?ID?4所示的氨基酸序列。

5.權(quán)利要求1至4所述的一種疫苗佐劑CCL28的制備方法，其步驟是：

A、從免疫接種受體分離得到脾臟細胞或外周血單核細胞，并抽提其總mRNA；

B、通過RT-PCR技術(shù)，將所得mRNA逆轉(zhuǎn)錄為單鏈cDNA；

C、設(shè)計CCL28特異性擴增的PCR引物對，并通過引物對在基因兩端分別引入合適酶切位點，然后通過PCR擴增得到CCL28基因片段；所述的引物對為：

小鼠：

正義鏈引物：5′-GATGAATTCATGCAGCAAGCAGGGCTCACACTC-3′

反義鏈引物：5′-TTACTCGAGCTAACGAGAGGCTTCGTGCCTGTG-3′

人：

正義鏈引物：5′-ATGAATTCATGCAGCAGAGAGGACTCGC-3′

反義鏈引物：5′-CGCTCGAGCTAATAAGGAGTTTTATGGC-3′

D、對CCL28基因片段和pcDNA3.1(+)，分別進行雙酶切，酶切得到的粘性末端片段通過T4連接酶連接，得到重組表達質(zhì)粒；

E、將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，然后將大腸桿菌在LB培養(yǎng)基中大量擴增培養(yǎng)，最后從培養(yǎng)好的大腸桿菌提取重組質(zhì)粒；

F、重組質(zhì)粒序列測定后，序列正確的重組質(zhì)粒即為本發(fā)明所述的基因型佐劑CCL28-pcDNA3.1。

6.權(quán)利要求1至5中所述的一種疫苗佐劑CCL28在肌肉注射型疫苗中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1至5中所述的一種疫苗佐劑CCL28在滴鼻免疫型疫苗中的應(yīng)用。