[發明專利]一種用于蓼科植物來源藥材的檢測方法

無效

• 申請號: 201210009364.7
• 申請日: 2012-01-13
• 公開（公告）號: CN102539574A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 李會軍;馬江;鄧婷;李萍
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及天然藥物的質量控制領域，具體涉及基于高效液相色譜-可變波長檢測器(HPLC-VWD)的分段檢測技術用于蓼科植物來源藥材(如：大黃、虎杖、何首烏等)中多類成分的同時檢測。

背景技術

蓼科植物，多草本或灌木，莖節常膨大。托葉包于莖節形成托葉鞘。花兩性或單性異株；單被，花被3-6，常花瓣狀；子房上位。瘦果或小堅果，常包于宿存花被內。本科約有30屬1200種，全球分布。我國15屬200余種，其中藥用種類約120種，全國均有分布。主要的屬有蓼屬(Polygonum)、大黃屬(Rheum)、酸模屬(Rumex)等。主要的生藥有大黃、何首烏、虎杖、拳參、萹蓄、金蕎麥、辣蓼、杠板歸、蓼大青等。

蓼科植物普遍含有蒽醌類、黃酮類、鞣質及各種苷類。蓼科植物來源藥材，如大黃、虎杖、何首烏等臨床應用相當廣泛，國內外關注度亦較高。近年來，針對蓼科植物的抗腫瘤活性有廣泛的研究。然而，關于蓼科植物的肝毒性報道也逐漸增多。因此，建立簡單適用的分析方法用于蓼科植物所含化學成分的定量檢測顯得尤為重要。建立簡單、快速、適用的檢測方法將有利于對蓼科植物的安全性及有效性評價。

2010版藥典中針對蓼科植物來源藥材的含量測定多為利用高效液相色譜串聯紫外檢測器(HPLC-UV)用于藥材的定量檢測，這種方法只檢測一類或兩類成分，很難反映出藥材的整體特點，難以達到對藥材安全性及有效性的全面評價。目前，對藥材進行多類成分同時檢測已成為藥材質量控制的重要手段。Komatsu等建立一種HPLC-UV方法，在280nm波長下定量檢測大黃藥材中30個化學成分，然而在280nm波長下很多化合物未達最大吸收，且在此方法中很多化合物未能基線分離，導致定量不準確。Lin等利用HPLC-UV方法用于大黃的定量檢測，該方法分別在280nm下檢測二苯乙烯類和沒食子酰葡萄糖，在254nm下檢測蒽醌類化合物，然而不同吸收波長下需要分別檢測，加大了工作量。因此，同時定量蓼科植物中多種類型化合物，用于蓼科植物的質量控制成為亟待解決的問題。

正因為蓼科植物所含化學成分種類較多，且各類化合物紫外吸收特征不同，利用HPLC-VWD用于蓼科植物的質量控制一直難以實現。這制約了蓼科植物的活性及毒性研究。因此，建立合適的定量檢測技術對蓼科植物的藥效及毒效物質基礎研究具有重要的意義。

以HPLC-VWD為基礎，應用分段檢測技術，研究一種可用于同時定量蓼科植物中酚酸類、黃酮類、二苯乙烯類和蒽醌類的方法，是本技術領域面臨的主要問題。

發明內容

本發明的目的在于建立一種基于HPLC-VWD的分段檢測技術，用于同時定量檢測蓼科植物中4種不同類型化合物的定量檢測，并應用于蓼科藥材的質量控制。

本發明通過如下方法實現：

我們建立基于HPLC-VWD的分段檢測技術：首先用HPLC將待檢測的各個化合物很好的分離開來，其次VWD可在不同時間段檢測不同的吸收波長，使得每一類化合物都能在其最大吸收處被檢測，從而大大提高了檢測的靈敏度，用于同時檢測和定量蓼科藥材中四種不同類型化合物，最后我們通過色譜條件選擇、方法學考察等研究，優化和確證建立方法的適用性，并將此方法用于蓼科藥材的質量控制。

本發明的具體方案如下：

使用高效液相色譜儀，可變波長檢測器，色譜工作站，將混合標準品液或蓼科藥材提取液，采用如下色譜條件分析：

色譜柱：安捷倫Zorbax?StableBond-C₁₈柱(50mm×4.6mm?I.D.，1.8μm)；

柱溫：20-35℃；

流動相：A相為0.05-0.5％甲酸水溶液，B相為乙腈；

梯度洗脫程序：0-2min，5-10％(v/v)B；2-4min，10-15％B；4-10min，15-15％B；10-11min，15-21％B；11-14min，21-21％B；14-21min，21-29％B；21-23min，29-40％B；23-25min，40-50％B；25-26min，50-50％B；26-28min，50-80％B；28-30min，80-100％B；30-32min，100-100％B。

流速：0.8ml/min；

檢測波長：0-9min和17-25min為280nm；6-12min和15-19min為320nm；12-14.5min和21-32min為254nm。

優選的柱溫為25℃。

優選的甲酸水濃度為0.1％，為體積百分比。