[發明專利]鑒定優質抗蟲雜交棉中棉所70品種真實性和／或品種純度的SSR分子標記方法

有效

• 申請號: 201210009203.8
• 申請日: 2012-01-12
• 公開（公告）號: CN102586426A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 袁友祿;石玉真;李俊文;商海紅;劉愛英;龔舉武;張金鳳;葛瑞華;龔萬奎;王濤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院棉花研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京知本村知識產權代理事務所 11039
• 代理人: 劉江良

1.一種鑒定優質抗蟲雜交棉?“中棉所70”種子真實性和／或品種純度的SSR標記方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）提取棉花雜交種“中棉所70”及其親本種子或幼苗葉片基因組DNA；

（2）以第（1）步提取的基因組DNA為模板，用SSR引物CGR5390、BNL1552、CGR5111和CIR246中的一個或多個引物，進行PCR擴增，其中，4個SSR特征引物堿基序列為：?

CGR5390引物其正向序列如SEQ?ID?No.1所示，反向序列如SEQ?ID?No.2所示；BNL1552引物其正向序列如SEQ?ID?No.所示，反向序列如SEQ?ID?No.4所示，CGR5111引物其正向序列如SEQ?ID?No.5所示，反向序列如SEQ?ID?No.6所示；CIR246引物序列如SEQ?ID?No.7所示，反向序列如SEQ?ID?No.8所示；

（3）對擴增產物進行凝膠電泳；

（4）對電泳結果進行分析，如果同時具有父母雙親本特異條帶的種子或單株鑒定為真正的雜交種，缺少其中的任意一個條帶均被視為假雜種，其中，4個SSR引物產生的特異標記帶大小為：

SSR引物CGR5390產生的母本特異標記CGR5390₂₀₅，條帶大小為205bp，產生的父本特異標記CGR5390₁₉₀，條帶大小為190bp；

SSR引物BNL1552產生的母本特異標記BNL1552₁₇₅，條帶大小為175bp，產生的父本特異標記BNL1552₁₈₀，條帶大小為180bp；

SSR引物CGR5111產生的母本特異標記CGR5111₁₃₅，條帶大小為135bp，產生的父本特異標記CGR5111₁₂₈，條帶大小為128bp；

SSR引物CIR246產生的母本特異標記CIR246₂₀₀，條帶大小為200bp，產生的父本特異標記CIR246₁₉₀，條帶大小為190bp。

2.根據權利要求1所述鑒定優質抗蟲雜交棉?“中棉所70”?種子真實性和／或品種純度的SSR標記方法，其特征在于，第（4）步還計算種子遺傳純度，具體計算方法如下：種子遺傳純度＝檢測到的與標準中棉所70F₁帶型相同的個體數/檢測總數×100%。

3.據權利要求1所述鑒定優質抗蟲雜交棉?“中棉所70”?種子真實性和／或品種純度的SSR標記方法，其特征在于：第（2）步中，以第（1）步提取的基因組DNA為模板，用SSR引物CGR5390、BNL1552、CGR5111和CIR246中的一個引物，進行PCR擴增。

4.根據權利要求1所述鑒定優質抗蟲雜交棉?“中棉所70”?種子真實性和／或品種純度的SSR標記方法，其特征在于：第（2）步中，?PCR擴增反應體系為：反應體系為10μ1，其中超純水6.40μ1，10×Buffer?1.0μ1，10mM?dNTPs?0.50μ1，10μM正向引物0.50μ1，10μM反向引物0.50μ1，30ng/μ1模板DNA1.0μ1?，5U/μ1Taq?DNA聚合酶0.10μ1；反應程序為：94℃預變性45s，1個循環；94℃變性30s，57℃退火45s，72℃延伸1min，29個循環；94℃變性60s，57℃退火45s，72℃延伸2min，一個循環；4℃保存待用。