[發明專利]轉Bt基因水稻標準質粒及其應用

有效

• 申請號: 201210008327.4
• 申請日: 2012-01-12
• 公開（公告）號: CN102586303A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 俞曉平;葉子弘;崔海峰;付賢樹;金榮愉;趙煦泓
• 申請（專利權）人: 中國計量學院
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12Q1/68
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一種轉Bt基因水稻標準質粒，由SEQ?ID?No.1所示核苷酸片段與SEQ?ID?No.2所示核苷酸片段經過拼接后，插入克隆載體制得。

2.如權利要求1所述的轉Bt基因水稻標準質粒，由SEQ?ID?No.3所示核苷酸片段插入pEASY-T3載體制得。

3.如權利要求1所述的轉Bt基因水稻標準質粒在檢測轉Bt基因農作物的轉基因含量中的應用。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于：所述的轉Bt基因水稻標準質粒用于檢測下列之一的Bt外源基因：(1)CryIA(a)，(2)CryIA(b)，(3)CryIA(c)，(4)CryIab/ac。

5.如權利要求3所述的應用，其特征在于：所述農作物可為下列之一：水稻、玉米、大豆、棉花、油菜。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于所述農作物為水稻。

7.一種轉Bt基因水稻的熒光定量PCR檢測試劑盒，主要包括特異性引物和探針、PCR緩沖液、脫氧三磷酸核苷混合物和DNA聚合酶和轉Bt基因水稻標準質粒，所述特異性引物和探針序列如下：

Bt-F-Primer：5’-GTAAGGTCGTTGTAACGGCTATTG-3’

Bt-R-Primer：5’-CGCCTTGACCACAGCTATCC-3’

Bt-Probe：5’-FAM-CCACCTTTGCCCAAACACGCTAACG-Eclipse-3’

SPS-F-Primer：5’-TTGCGCCTGAACGGATAT-3’

SPS-R-Primer：5’-CGGTTGATCTTTTCGGGATG-3’

SPS-Probe：5’-FAM-TCCGAGCCGTCCGTGCGTC-TAMRA-3′，

其中FAM為熒光報告基團，Eclipse和TAMRA為熒光淬滅基團；

上述的轉Bt基因水稻標準質粒由SEQ?ID?No.3所示核苷酸片段插入pEASY-T3載體制得。