[發明專利]一種體外誘導人臍帶間充質干細胞高表達Nurr1基因的方法

有效

• 申請號: 201210008088.2
• 申請日: 2012-01-12
• 公開（公告）號: CN102586183A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 謝姜;劉擁軍;朱德琳;趙雅寧
• 申請（專利權）人: 天津和澤干細胞科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種體外誘導間充質干細胞高表達Nurr1基因的方法，其特征是在添加了維甲酸（RA）、環化腺核苷一磷酸（CAMP）和Sonic?Hedgehog（SHH）的基礎培養基中誘導間充質干細胞高表達Nurr1基因。

2.根據權利要求1的方法，所述基礎培養基為DMEM/F-12。

3.根據權利要求1的方法，所述間充質干細胞為人臍帶間充質干細胞。

4.根據權利要求1-3任一項的方法，所述基礎培養基中添加的RA為10^-6?M～10^-4?M?、CAMP為0.5?mM～2?mM和SHH為200?ng/mL～750?ng/mL。

5.根據權利要求4的方法，所述RA為10^-5M，CAMP為1?mM和SHH為500?ng/mL。

6.根據權利要求5的方法，其包含以下步驟：

（1）取2～8代人臍帶間充質干細胞，當細胞貼壁生長至80%～90%融合時，吸除T₇₅培養瓶內原有培養液，取5～10?mL?0.01M?PBS輕輕加入T₇₅培養瓶內洗滌，棄去洗液；

（2）加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.01%(w/v)?EDTA消化液1.0?mL，浸漫覆蓋瓶底，倒置顯微鏡下觀察見細胞呈圓形漂起時，加入1.0?mL胎牛血清中止胰蛋白酶消化；

（3）加入20?mL?0.01?M?PBS反復吹打沖洗，在室溫下1000?轉/分離心5分鐘；棄去上清液后，加入10?mL?DMEM/F-12重懸細胞，在T₂₅培養瓶中接種5×10⁵個人臍帶間充質干細胞；

（4）培養體系為含5%?胎牛血清，100?U/mL青霉素，100μg/mL鏈霉素的DMEM/F-12完全培養液，添加了10^-5?M?RA、1?mM?CAMP和500?ng/mL?SHH，總體積為5?mL/瓶，置37??C，5%二氧化碳培養箱中培養2～4天。