[發明專利]檢測膜通道蛋白與靶向藥物的相互作用的方法及其應用

無效

• 申請號: 201210008055.8
• 申請日: 2012-01-12
• 公開（公告）號: CN102565006A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 吉永華;葉品;董邦乾;馮興華;楊宏天
• 申請（專利權）人: 上海大學
• 主分類號: G01N21/55
• 分類號: G01N21/55;C07K7/08;C07K14/00
• 代理公司: 上海上大專利事務所(普通合伙) 31205
• 代理人: 陸聰明

1.一種檢測膜通道蛋白與靶向藥物相互作用的方法，其特征在于該方法的具體步驟為：

a.?根據膜通道蛋白上與其靶向藥物相互作用位點上的關鍵氨基酸序列，合成肽鏈；

b.采用表面等離子共振技術檢測步驟a所得的肽鏈與靶向藥物的相互作用。

2.根據權利要求1中所述的檢測膜通道蛋白與靶向藥物相互作用的方法，其特征在于所述的膜通道為細胞電壓門控鈉通道，該通道的位點3與其靶向藥物相互作用的關鍵氨基酸序列為DⅣ/S3-S4胞外環，根據該關鍵氨基酸序列設計的兩段肽鏈為：

rNav1.5??SIVGTVLSDIIQKYFFSPTL

rNav1.8??SIGSLLFSAILKSLENYFSPTL；

所述的靶向藥物為鈉通道靶向藥物BmK?I。

3.根據權利要求1所述的檢測膜通道蛋白與靶向藥物相互作用的方法，其特征在于所述的步驟b的具體方法為：

a.?靶向藥物的芯片固化：

注入400mM的N-ethy1-N-(dimethylaminepropyl)-carbodiimid和100mM的N-hydroxy-succimide的按1:?1的體積比混合成的混合液，激活CM5傳感器芯片上的偶聯基團-COOH；將靶向藥物以23μg/ml的配置濃度置于pH5.0、10mM醋酸鈉溶液中，取30μl注入芯片；

b.取一系列結合反應終濃度下的肽鏈分別以20ul/min的流速通過步驟a所得的固化有靶向藥物的傳感器芯片；所有反應在4℃進行；使用的結合反應液為：?NaCl?150?mM，CaCl₂?1.2?mM，MgCl₂?1?mM，KCl?3.5?mM，HEPES?10，D-glucose?20?mM，用NaOH調至pH7.4。

4.根據權利要求3所述的檢測膜通道蛋白與靶向藥物相互作用的方法，其特征在于所述的肽鏈為：

rNav1.5??SIVGTVLSDIIQKYFFSPTL

rNav1.8??SIGSLLFSAILKSLENYFSPTL；所述的靶向藥物為鈉通道靶向藥物BmK?I。