[發明專利]一種羅非魚精子通用激活液及制備方法

無效

• 申請號: 201210007531.4
• 申請日: 2012-01-11
• 公開（公告）號: CN102578007A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 柳凌;鄒桂偉;張濤;梁宏偉;張潔明;李忠;郭峰
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院長江水產研究所
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明涉及羅非魚品種的精子技術領域，更具體涉及一種羅非魚精子通用激活液，同時還涉及一種羅非魚精子通用激活液的制備方法，適合所有羅非魚品種的精子。

背景技術

羅非魚(Tilapia)為一種中小型魚，被譽為未來動物性蛋白質的主要來源之一。原產于非洲，上世紀70年代被引進到我國，目前已成為我國一個重要的水產養殖品種。隨著我國對羅非魚品種的選育和改良，除最初引進的尼羅羅非魚(O.niloticus)和奧尼亞羅非魚(O.aureus)外，又培育了許多新的品種。如：尼羅羅非魚和奧尼亞羅非魚的雜交后代奧尼羅非魚；通過3系雜交選育的后代尼羅超雄魚；以及由8個品系的尼羅羅非魚經雜交混合選育的吉富羅非魚等。

為了能進一步開展羅非魚的新品種選育以及羅非魚的人工繁殖，為市場提供更優質的羅非魚新品種和苗種，需要進行羅非魚精子超低溫保存，并將保存后的精液應用于羅非魚的人工繁殖過程中。然而，當精子被超低溫保存時，為了提高精子的抗凍能力，除了對精液進行稀釋外，還需要在稀釋的精液中添加一定量的抗凍劑，如二甲亞砜(DMSO)等。由于抗凍劑具有很強的吸水性，當被添加到精液中后，可以使精子細胞內的一部分水被吸出。精子細胞的水分流失導致精子細胞內的細胞液濃度升高，精子的冰點也隨之升高，從而提升了精子的抗凍能力。也正是由于精子細胞內的細胞液濃度升高，精子的滲透壓也會隨之升高。這樣，經超低溫保存后的精子再解凍后，一般稱為凍精，其滲透壓與鮮精(未經超低溫保存的，新擠出的精子)相比會高出30～40％。經超低溫保存1年后的羅非魚凍精滲透壓可以達到388.4mOsM。含如此高內部滲透壓的凍精，如果直接用淡水激活進行人工授精，在巨大的滲透壓差作用下，其凍精一遇見水就可能破裂，從而使人工授精失敗。解決這一問題的辦法就是用具有一定滲透壓的精子激活液來替代淡水對羅非魚凍精進行激活，以減少這種滲透壓差。因此，羅非魚精子激活液的作用就是減少這種滲透壓差，使羅非魚凍精在激活時不會破裂，順利實現用凍精進行羅非魚人工授精。

另一方面，羅非魚精子激活液除了減少凍精與激活液間的滲透壓差，保護凍精在激活過程中不破裂的作用外，對一般羅非魚鮮精也有使精子活力優化的作用。這是因為激活液是由不同離子或大分子物質組成的，這些離子和大分子物質對精子的運動可以起到一定的優化作用。如：Na離子主要是起調節激活液滲透壓的作用；K離子起著改變精子膜表面通透性的作用；Ca、Mg離子則起著增加或降低精子運動速度的作用；而CO₃離子則起著調節激活液pH的作用等。除此之外，有報道顯示葡萄糖和蔗糖等大分子類溶質除了起到調節滲透壓的作用外，還具有提供精子能量的作用。羅非魚精子激活液是由蔗糖、KCl、MgCl₂和NaHCO₃等4種物質組成。由于這些物質對羅非魚精子的不同作用，使羅非魚精子被激活后的生物學特性發生了很大變化。通過計算機輔助分析發現，采用羅非魚精子激活液激活的精子與不采用激活液激活的精子比較，呈快速直線運動的精子比例由58％提高到72％；精子曲線運動的平均速度(VCL)由35.96±1.68μm/s提高到42.90±1.54μm/s；精子直線運動的平均速度(VSL)由20.62±1.21μm/s提高到25.86±1.35μm/s；精子路徑運動的平均速度(VAP)由23.54±0.43μm/s提高到29.30±1.08μm/s；精子的平均壽命由4分30秒提高到5分45秒。由此可見，羅非魚精子激活液對提高羅非魚精子的活力起著十分重要的作用。

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種羅非魚精子通用激活液，適合各種羅非魚品種精子的激活，是采用羅非魚鮮精和凍精進行人工授精所必須的一種溶液。在用羅非魚凍精授精時，它可減少凍精與授精環境間的滲透壓差，使羅非魚凍精在激活時不會破裂，順利實現用凍精進行羅非魚人工授精。在用鮮精進行人工授精時，它可有效提高鮮精的活力，從而提高受精率。

本發明的另一個目的是在于提供了一種羅非魚精子通用激活液的制備方法，方法易行，操作簡便，適合配制各種體積的激活液，可確保所配制激活液中個組分濃度的準確性。

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：

一種羅非魚精子通用激活液，它由以下重量份的原料制成：

激活液滲透壓為87.4～134.2mOsM，pH為8.0～9.0。

一種羅非魚精子通用激活液，它由以下重量份的原料制成：

激活液滲透壓為93.6～128.4mOsM，pH為8.1～8.9。