[發(fā)明專利]一種尼羅羅非魚精子超低溫保存的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210007382.1
• 申請日: 2012-01-11
• 公開（公告）號: CN102578075A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設計）人: 柳凌;鄒桂偉;張濤;梁宏偉;張潔明;李忠;郭峰
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院長江水產研究所
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種尼羅羅非魚精子超低溫保存的方法，其步驟是：

(1)尼羅羅非魚精子的采集：選擇性腺發(fā)育成熟的尼羅羅非魚雄魚，用干毛巾擦干生殖孔周圍及腹部的水，用手輕輕擠壓雄魚腹部，待能擠出精液后，前面3-6滴精液不要，然后將精液擠入干燥的容器中，混勻；

(2)精子活力檢測：在10×20倍的顯微鏡下進行鏡檢，計算機輔助檢測鮮精平均活率達到85％，平均曲線運動速度達到35微米/秒，平均直線運動速度達到20微米/秒，該精子適合用于超低溫冷凍保存，將鏡檢合格的精子放入4℃冰箱保存?zhèn)溆茫?/p>

(3)精子的稀釋：精確量取需要被冷凍的尼羅羅非魚精液，加入精液3倍體積的精子稀釋液，使精液與稀釋液的稀釋比達到1∶3，精液與稀釋液混勻，備用；

(4)精液的凍前平衡：將稀釋后的精液放入4℃冰箱，進行凍前平衡，尼羅羅非魚精液的凍前平衡時間為20-120分鐘，20分鐘為最少平衡時間，120分鐘為最長平衡時間；

(5)加抗凍劑及分裝：在平衡好的尼羅羅非魚精液中直接加入抗凍劑二甲亞砜，加入的量為稀釋后精液總量的8～9％，使抗凍劑在精液中的終濃度達到8％，抗凍劑加入后，混勻，分裝；

(6)程序降溫：程序降溫是在程序降溫儀中進行，程序降溫儀由計算機控制，計算機被輸入降溫程序后，程序降溫儀按照程序開始降溫，將分裝好的精液放入程序降溫儀的冷凍室中，尼羅羅非魚的降溫程序從0℃開始，以5℃/分鐘的速度降至-15℃，在-15℃停留5分鐘，然后再以25℃/分鐘速度從-15℃降至-85℃，最后在-85℃處平衡10分鐘；

(7)進入液氮：降溫完成后，直接將裝有精液的麥管或冷凍管連同冷凍支架一起從程序降溫儀中取出，放入液氮罐中，在-196℃溫度中保存。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種尼羅羅非魚精子超低溫保存的方?法，所述的精子稀釋液為羅非魚稀釋液，其配方為：127.5mmol/L氯化鈉，7.5mmol/L氯化鉀，2.5mmol/L碳酸氫鈉，2.0mmol/L氯化鈣，該稀釋液滲透壓為293.0mOsM，pH為8.5，放置在4℃冰箱保存。?