[發明專利]以適體為識別單元的膠體晶體凝膠非標記可視化檢測方法

無效

• 申請號: 201210007176.0
• 申請日: 2012-01-11
• 公開（公告）號: CN102590185A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 顧忠澤;葉寶芬;趙遠錦;謝卓穎;程瑤;上官鳳棲
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: G01N21/75
• 分類號: G01N21/75
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 范晴

1.?一種以適體為識別單元的膠體晶體凝膠非標記可視化檢測方法，其特征在于所述方法包括以下步驟：

（1）膠體晶體水凝膠薄膜的制備：將單分散的膠體納米粒子加入水凝膠前聚體溶液中，調節膠體納米粒子溶液中膠體納米粒子的質量百分數為10%～80%，超聲分散，直至膠體納米粒子溶液產生結構色；然后加入引發劑后，灌入模具，靜置0.1～2?h，經紫外光照射聚合或烘箱內通過熱固化法對結構色膠體溶液進行固化，即得膠體晶體水凝膠薄膜，將所得到的膠體晶體水凝膠薄膜從模具上剝落，洗滌后置于純水中保存；

（2）適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜的制備：

通過化學鍵偶聯方法將適體偶聯在步驟（1）中洗滌后的膠體晶體水凝膠薄膜上，制成適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜，將制備好的薄膜用磷酸緩沖液洗滌之后得到檢測用的膠體晶體水凝膠薄膜，測定檢測用的膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜；

（3）目標分析物的檢測：

將步驟（2）中得到的檢測用的膠體晶體水凝膠薄膜在緩沖溶液中與待測樣品混合進行適體和樣品的特異性結合反應，反應完畢，洗滌后檢測反應后的膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜，通過比較反應前后膠體晶體水凝膠薄膜的顏色或通過測定膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜，確定待測物質的含量。

2.?根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法步驟（2）采用的適體為分子識別單元，為核酸適體或RNA適體中的一種或多種。

3.?根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法步驟（1）采用膠體納米粒子材料選自二氧化硅、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、二氧化鈦、鐵的氧化物、金、銀中的一種或兩種以上的材料；所述的水凝膠前聚體為丙烯酰胺、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸羥乙酯、醋酸丁酸纖維素、硅氧烷甲基丙烯酸酯、氟硅甲基丙烯酸酯、全氟醚、N-乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、甲基丙烯酸縮水甘油酯或二甲基丙烯酸乙二醇酯中的一種或兩種以上的任意混合。

4.?根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法步驟（1）中膠體納米粒子的粒徑在10納米到500納米之間；所述膠體納米粒子的濃度在10%～80%。

5.?根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法步驟（2）中適體修飾的化學鍵偶聯方法選自氨基與氨基的反應、氨基與羧基的反應或羧基與羥基的反應中的一種或兩種以上的任意組合。

6.?根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法步驟（3）中待測樣品中檢測對象為離子、藥物分子、毒品分子、添加劑、小分子、神經遞質、激素、蛋白質、酶、抗原抗體、細胞因子、生長因子、腫瘤標志物或各種生物分子中的一種。

7.?根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法步驟（3）中待測樣品中檢測對象為汞離子、鉛離子、鉀離子、可卡因、凝血酶中的一種。