[發(fā)明專利]靜注人免疫球蛋白的生產(chǎn)工藝

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210006873.4
• 申請日: 2012-01-11
• 公開（公告）號: CN102552906A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張振;張華平;張泓喆;趙軍
• 申請（專利權(quán)）人: 西安回天血液制品有限責(zé)任公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61K9/08;A61K47/16;A61K47/22
• 代理公司: 西安新思維專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 61114
• 代理人: 李罡

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種免疫球蛋白的生產(chǎn)工藝，具體涉及一種靜注人免疫球蛋白的生產(chǎn)工藝。

背景技術(shù)

目前，從血漿中提取白蛋白的分離提取工藝主要采用基于Cohn6法的低溫乙醇法來進(jìn)行，該方法是根據(jù)血漿蛋白理化性質(zhì)的差別，加入不同濃度的鹽、有機(jī)溶劑和酸堿，通過改變影響蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的條件而分別沉淀提取出不同的蛋白質(zhì)。

在低溫乙醇法中影響蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)的因素主要有5個，即pH值、溫度、蛋白濃度、離子強(qiáng)度、乙醇濃度。通過控制這些參數(shù)可以逐級沉淀血漿中的不同蛋白質(zhì)成份，一般先從血漿中沉淀出組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ，然后再分離出組份Ⅱ，最終從組份Ⅱ中獲得人免疫球蛋白。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種直接從低溫乙醇法組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中提取靜注人免疫球蛋白產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種靜注人免疫球蛋白的生產(chǎn)工藝，其特征在于：

由以下步驟實現(xiàn)：

步驟一：取組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，注入10-15倍體積、5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在1～5℃攪拌溶解后，調(diào)節(jié)pH值至5.2±0.1，加入乙醇至濃度13-15%，并控制溶液溫度在-5--3℃之間；

步驟二：待沉淀產(chǎn)生完全后，在混合溶液中按體積加入珍珠巖至3.0±0.2g/L，硅藻土至3.0±0.2g/L，加壓過濾分離出體系中產(chǎn)生的沉淀，取出濾過液，調(diào)節(jié)pH值至7.1±0.1，按體積加入氯化鈉至3.7±0.1g/L，繼續(xù)添加乙醇至濃度19～21%，控制液體溫度在-8～-6℃；

步驟三：待沉淀產(chǎn)生完全后，在混合溶液中按體積加入珍珠巖至3.0±0.2g/L，硅藻土至3.0±0.2g/L，壓濾分離出體系中產(chǎn)生的沉淀；

步驟四：將步驟三得到的沉淀用5～7倍體積、5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在1～5℃，攪拌1.5～2小時令其溶解；調(diào)節(jié)pH值至6.8±0.2，繼續(xù)添加乙醇至濃度4.5±1%，同時降溫至0±1℃，深層過濾；

步驟五：將深層過濾后的濾液，調(diào)節(jié)電導(dǎo)率至0.14±0.05ms/m，pH值至6.8±0.2，用Q-瓊脂糖凝膠FF進(jìn)行離子交換層析，流出液調(diào)節(jié)pH值至5.2±0.2，電導(dǎo)率至0.10±0.05ms/m，用DEAE?SFF進(jìn)行離子交換層析處理；

步驟六：層析后的液體調(diào)節(jié)pH值至4.2±0.3，進(jìn)行超濾處理，用8～10倍注射用水透析，最后濃縮至蛋白含量在50～90g/L之間；

步驟七：濃縮后的液體采用孔徑0.1μm的濾芯預(yù)過濾，之后再用15-20nm孔徑的納米膜進(jìn)行過濾去除病毒；

步驟八：納米膜過濾后的液體超濾濃縮至蛋白濃度102±1g/L，調(diào)節(jié)pH值至4.8±0.3，按體積加入250±40mmol/L的甘氨酸或L-脯氨酸；

步驟九：將配制好的蛋白質(zhì)溶液除菌分裝后，37℃下放置4小時進(jìn)行低pH病毒滅活，經(jīng)燈檢包裝后獲得靜注人免疫球蛋白制品。

所述的pH值調(diào)節(jié)均采用氫氧化鈉。

所述的添加乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%。

????本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

????與一般靜注人免疫球蛋白產(chǎn)品生產(chǎn)工藝相比，該發(fā)明有效提高了人免疫球蛋白的總收得率，降低了生產(chǎn)成本，提高了企業(yè)利潤；在分離過程中按各組份分步沉淀，并采用離子交換層析進(jìn)行純化，生產(chǎn)工藝更加精細(xì)，提高了制品的質(zhì)量。采用低pH孵放滅活病毒工藝和納米膜過濾去除病毒的二次病毒滅活工藝，提高了產(chǎn)品的安全性。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。

本發(fā)明采用白蛋白提取過程中產(chǎn)生的組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，通過調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的pH值、溫度、蛋白濃度、離子強(qiáng)度、乙醇濃度，經(jīng)分步壓濾分離技術(shù)分離出不同成份的蛋白質(zhì)，有效提取組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中的人免疫球蛋白。

本發(fā)明所述的靜注人免疫球蛋白產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝由以下步驟實現(xiàn)：

實施例一：

步驟一：從冷庫中取出組份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，稱重后置于潔凈的不銹鋼反應(yīng)罐中，向反應(yīng)罐中注入10倍體積、5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液溫度在1℃，攪拌3小時令其溶解。待沉淀完全溶解后，加入pH=4.3的醋酸緩沖液調(diào)節(jié)pH值至4.7，再加入pH=5.9的醋酸緩沖液調(diào)節(jié)pH值至5.1。緩慢加入95%（v/v）的乙醇令溶液中乙醇含量達(dá)到13%，并控制溶液溫度在-5℃之間。