[發(fā)明專利]現(xiàn)場(chǎng)用快速免疫檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210006847.1
• 申請(qǐng)日: 2012-01-09
• 公開（公告）號(hào): CN102565387A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄒潮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 哈德遜（天津）生物技術(shù)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558
• 代理公司: 天津市鼎和專利商標(biāo)代理有限公司 12101
• 代理人: 朱瑜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種現(xiàn)場(chǎng)用快速免疫檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

目前，現(xiàn)行的競(jìng)爭(zhēng)法免疫層析檢測(cè)試紙條制作時(shí)，在支持板(如PVC板)上依次粘貼有樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜、吸水墊等。在硝酸纖維素膜上劃線包被1條抗原線作為檢測(cè)線(T線)，在其下游包被1條二抗線用予捕獲抗體線作為參考線。然后依次粘貼樣品墊、金標(biāo)墊、吸水墊，即組合為快速檢測(cè)試紙。檢測(cè)時(shí)，于樣品墊上滴加水溶液樣品，5～10min內(nèi)觀察顏色。若檢測(cè)線呈現(xiàn)紅顏色，表明樣品為陰性；若檢測(cè)線不顯色，表明樣品為陽性。無論樣品是陰性還是陽性，參考線應(yīng)該顯色，若參考線不顯色，表明該試紙失效。

現(xiàn)行的競(jìng)爭(zhēng)法免疫層析檢測(cè)試紙條是“單份”測(cè)定而且試紙條上的質(zhì)控線(C線)實(shí)際上是測(cè)定一抗的存在，至于一抗有否失活是測(cè)不出來的。假如，待測(cè)樣品中目標(biāo)物不存在(陰性)，而金標(biāo)抗體失活不能和T線上包埋的抗原結(jié)合但照樣會(huì)被C線上的二抗捕獲顯色而得出陽性結(jié)果。而實(shí)際上是因試紙條失效而顯示的假陽性。相反，假如待測(cè)樣品中目標(biāo)物存在，但質(zhì)控線C線上捕獲抗體(二抗)失活而金標(biāo)抗體正常，那么金標(biāo)抗體和目標(biāo)物結(jié)合后不能和T線上包埋的抗原結(jié)合(這是正常陽性情景)但由于不能與C線上失活的捕獲蛋白/抗體結(jié)合顯色而得出試紙條失效的結(jié)論。而實(shí)際上應(yīng)該是陽性。因此現(xiàn)行的競(jìng)爭(zhēng)法免疫層析檢測(cè)試紙條的質(zhì)控線(C線)的結(jié)果不能完全用于評(píng)價(jià)試紙條質(zhì)量的好壞。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決公知技術(shù)中存在的技術(shù)問題，而提供一種現(xiàn)場(chǎng)用快速免疫檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。

本發(fā)明公開一種現(xiàn)場(chǎng)用競(jìng)爭(zhēng)法免疫檢測(cè)試劑盒。該試劑盒包括一個(gè)三反應(yīng)槽測(cè)試板或多反應(yīng)槽測(cè)試板，樣品稀釋液反應(yīng)液，液滴瓶，一組陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，試紙條和顯色液。

測(cè)試板：含有三個(gè)或三個(gè)以上反應(yīng)槽的成形板。可用于同時(shí)測(cè)定陽性對(duì)照，陰性對(duì)照以及一個(gè)或一個(gè)以上的待測(cè)樣品。

測(cè)試板是具有固定形狀可盛裝液體、常溫常壓下化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定不與待測(cè)的樣品及檢測(cè)系統(tǒng)中的物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的成形板。該測(cè)試板可以是一次性使用的也可以是經(jīng)洗滌后可多次使用的。該測(cè)試板的反應(yīng)槽可以是臥式排列，也可以是立式排列。

測(cè)試板是一個(gè)含有三個(gè)或三個(gè)以上反應(yīng)槽的塑膠板(比如聚苯乙烯)或紙質(zhì)板。

反應(yīng)液：含有預(yù)先標(biāo)記好的可特異性地識(shí)別待測(cè)分子的抗體。該特異抗體的標(biāo)記可以是膠體金，酶(如過氧化氫酶，堿性磷酸酶)，熒光分子或其它有助于直接或間接地測(cè)試被標(biāo)記抗體的分子。

試紙條：含有預(yù)先包埋好的抗原分子或半抗原偶聯(lián)分子。該抗原或半抗原是可以被所述的反應(yīng)液中含有的抗體所識(shí)別的分子。也可以是能與待測(cè)分子競(jìng)爭(zhēng)性地與所述反應(yīng)液中的抗體相結(jié)合的分子。

陽性對(duì)照和陰性對(duì)照：試劑盒中的至少有一個(gè)已知濃度的陽性對(duì)照其所含的待測(cè)目標(biāo)分子的濃度正好是臨床需求或產(chǎn)品質(zhì)量要求上的界限濃度。比如：含有1微克/毫升三聚氰胺的牛奶。因此，這樣的陽性對(duì)照可以用于直觀地比較測(cè)定樣品是否超標(biāo)。

試劑盒中的至少有一個(gè)不含待測(cè)目標(biāo)分子的陰性對(duì)照。比如：不含三聚氰胺的牛奶。這樣通過比較陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和定測(cè)定樣品的顯色程度可以校準(zhǔn)確地界定測(cè)定樣品所含的待測(cè)目標(biāo)分子的濃度范圍，并可用于判定檢測(cè)系統(tǒng)本身有否失效。

試劑盒中的可以有一個(gè)以上不同濃度的陽性對(duì)照組最好其中有一個(gè)對(duì)照所含的待測(cè)目標(biāo)分子的濃度正好是臨床需求或待測(cè)產(chǎn)品質(zhì)量要求上的界限濃度。比如：含有1微克/毫升三聚氰胺的牛奶。這樣的一組陽性對(duì)照組可以用于半定量測(cè)定樣品中待測(cè)目標(biāo)分子的濃度。

顯色液：是可以根據(jù)稀釋液中的特異抗體的標(biāo)記來配套的。

滴瓶：滴瓶的口配有一套蓋子內(nèi)蓋和外蓋。內(nèi)蓋是有通道的蓋，通道上裝有一慮膜的以防止細(xì)菌進(jìn)入瓶內(nèi)，同時(shí)在使用瓶內(nèi)液體時(shí)防止瓶內(nèi)沉淀物被擠出造成濃度不均，也防止液體逆流，所述慮膜的孔徑在0.1-10u之間；外蓋是可以蓋在內(nèi)蓋上的蓋子以防液體蒸發(fā)而改變瓶內(nèi)液體濃度。

試劑盒中的反應(yīng)液、陽性對(duì)照液、陰性對(duì)照夜，待測(cè)樣品液、稀釋液和顯色液是分別裝在相同規(guī)格的滴瓶里，這樣可根據(jù)擠出液體的滴數(shù)來確定其添加量。所述滴瓶的口徑控制在一定的范圍，比如每滴50微升誤差不超過+/-3微升。

本發(fā)明的目的之一是提供一種具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，使用方便，檢測(cè)效率高，實(shí)現(xiàn)在一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)測(cè)定未知濃度的樣品和已知濃度的陽性對(duì)照和陰性對(duì)照以便正確地界定檢測(cè)結(jié)果和有效性，便捷進(jìn)行半定量地界定被檢樣品中所含目標(biāo)分子的濃度等特點(diǎn)的現(xiàn)場(chǎng)用快速免疫檢測(cè)試劑盒。