[發(fā)明專利]利用幼穗拯救獲得轉(zhuǎn)基因小麥的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210006728.6
• 申請日: 2012-01-11
• 公開（公告）號: CN103205455A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李根英;夏先春;李玉蓮;高潔;宋國琦;宋華東;何中虎;黃承彥;樊慶琦;隋新霞;楚秀生
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

1.培育轉(zhuǎn)基因小麥的方法，包括通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)將目的DNA轉(zhuǎn)入小麥細(xì)胞的步驟，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

1)將含有目的DNA表達(dá)載體的重組農(nóng)桿菌接種于胚芽鞘長為1.0mm-1.2mm的露白小麥種子的莖尖分生組織中，培養(yǎng)所述露白小麥種子獲得處于雌雄蕊分化期的幼穗；

2)取步驟1)得到的處于雌雄蕊分化期的幼穗進(jìn)行離體脫分化得到愈傷組織，保留含有所述目的DNA的愈傷組織，得到所述轉(zhuǎn)基因小麥。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟1)中所述接種是在所述胚芽鞘長為1.0mm-1.2mm的露白小麥種子的莖尖分生組織中注入1μL所述含有目的DNA表達(dá)載體的重組農(nóng)桿菌菌液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述重組農(nóng)桿菌菌液的OD₆₀₀為0.6。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述重組農(nóng)桿菌菌液中含有乙酰丁香酮0.4mmol/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述農(nóng)桿菌為根癌農(nóng)桿菌。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：步驟2)中所述離體脫分化按照包括如下步驟的方法進(jìn)行：將所述處于雌雄蕊分化期的幼穗接種于脫分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得愈傷組織。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：步驟2)中所述離體脫分化得到愈傷組織，保留含有所述目的DNA的愈傷組織后，還包括將所述含有所述目的DNA的愈傷組織接種于分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得具有根莖葉的小麥植株的步驟。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述脫分化培養(yǎng)基和所述分化培養(yǎng)基的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)的光照條件為：連續(xù)光照，所述連續(xù)光照的光照強(qiáng)度為1500LUX。