[發明專利]一種檢測地溝油的方法及試紙與應用

有效

• 申請號: 201210005898.2
• 申請日: 2012-01-10
• 公開（公告）號: CN102590514A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 陳守義;楊智聰;李軍濤;侯水平;姬澤薇
• 申請（專利權）人: 廣州市疾病預防控制中心
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

1.一種檢測地溝油的方法，其特征在于：是以細菌脂多糖抗體和/或脂溶性蛋白抗體作為抗體進行檢測。

2.根據權利要求1所述的所述的檢測地溝油的方法，其特征在于包含以下步驟：待檢樣品與抗體A反應后，加入葡聚糖-抗體B-熒光素混合標記物繼續反應，通過檢測熒光的裝置進行檢測，從而確定待檢樣品中是否含有地溝油；

所述的抗體A為細菌脂多糖單克隆抗體或細菌脂溶性蛋白單克隆抗體中的一種或兩種；

所述的抗體B為同樣為細菌脂多糖單克隆抗體或細菌脂溶性蛋白單克隆抗體中的一種或兩種；

所述的抗體A與所述的抗體B是相同的蛋白或是不同的蛋白。

3.根據權利要求2所述的所述的檢測地溝油的方法，其特征在于包含以下步驟：

所述的抗體A為通過名稱為雜交瘤細胞株gzcdc-ETX001的單克隆細胞株制備得到，該單克隆細胞株于2011年12月4日保藏位于中國湖北省武漢市武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：C2011111；

所述的抗體B為通過名稱為雜交瘤細胞株gzcdc-ETX001的單克隆細胞株制備得到，該單克隆細胞株于2011年12月4日保藏位于中國湖北省武漢市武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：C2011111。

4.根據權利要求2所述的所述的檢測地溝油的方法，其特征在于包含以下步驟：所述的葡聚糖-抗體B-熒光素混合標記物通過以下步驟制備得到：

(1)將熒光素分子與以親水鏈為骨架的葡聚糖分子反應，得到結合熒光素的葡聚糖分子；

(2)將結合熒光素的葡聚糖分子與抗體B反應，純化，得到葡聚糖-抗體B-熒光素混合標記物。

5.根據權利要求4所述的所述的檢測地溝油的方法，其特征在于包含以下步驟：所述的葡聚糖為分子量20,000～30,000的葡聚糖；

所述的熒光素為異硫氰酸熒光素；

所述的純化為通過凝膠層析法進行分離純化。

6.根據權利要求4所述的所述的檢測地溝油的方法，其特征在于包含以下步驟：所述的葡聚糖-抗體B-熒光素混合標記物通過以下步驟制備得到：

(1)結合熒光素的葡聚糖分子的制備：用有機溶劑溶解熒光素，在磁力攪拌條件下，滴加在含葡聚糖的醋酸溶液中，避光反應，使得熒光素上的碳原子與葡聚糖上的二乙烯砜反應以便進行標記偶聯；反應結束后，將pH值調至8.8～9.2，離心，取沉淀，得到結合熒光素的葡聚糖分子；其中，熒光素和葡聚糖按質量比1∶8～10進行配比；

(2)葡聚糖-抗體B-熒光素混合標記物初產物的制備：洗滌步驟(1)得到的沉淀，再用醋酸溶液溶解沉淀，接著將pH值調節為4.8～5.2；在磁力攪拌條件下，滴加入抗體B溶液，反應，得到葡聚糖、抗體B和熒光素混合標記物初產物；抗體B的用量按1mg熒光素加入10mg免疫球蛋白計算；

(3)葡聚糖-抗體B-熒光素混合標記物的制備：使用葡聚糖凝膠裝柱，用pH值6.8～7.2、0.002～0.01M的磷酸緩沖液平衡；將步驟(2)得到的葡聚糖、抗體B和熒光素混合標記物初產物上樣，再用pH值6.8～7.2、0.002～0.01M的磷酸緩沖液洗脫，當黃綠色熒光出現在洗脫液時，收集全部黃綠色熒光溶液；將黃綠色熒光溶液透析，得到葡聚糖-抗體B-熒光素混合標記物。