[發明專利]一種葡萄無性系品種的育種方法

無效

• 申請號: 201210005630.9
• 申請日: 2012-01-09
• 公開（公告）號: CN102524055A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 吳月燕;王忠華;崔鵬
• 申請（專利權）人: 浙江萬里學院
• 主分類號: A01H1/06
• 分類號: A01H1/06;A01H1/04
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙) 33228
• 代理人: 代忠炯

1.一種葡萄無性系品種的育種方法，其特征在于：通過人工物理誘變的方式，獲得抗病、早熟、優質的葡萄優良單株。

2.根據權利要求1所述的一種葡萄無性系品種的育種方法，其特征在于：育種方法的具體步驟包括：

(1)育種目標的確定：以抗病、早熟、優質為主要育種目標；

(2)育種材料的選取：選擇具有良好經濟性狀但在某些性狀需要改良的品種，誘變種子從品種純正、已經進入盛果期、生長健壯、無病蟲害的植株上采集；當葡萄果實完全成熟，選擇果穗整齊、果粒發育良好的果實采集種子，種子采集后選擇飽滿的種子，用清水反復沖洗洗凈粘在種子表面的果肉，然后用20％多菌靈1000倍液浸泡15分鐘消毒，再用清水沖洗后在陰涼處晾干；晾干的種子用5份沙子、1份種子混合后置于4～5℃的冰箱中貯藏；第二年2～3月將種子進行分組，每300粒為一組，分為6組，其中1組為對照，5組用于輻照處理；

(3)物理誘變劑量的選擇：通過預備試驗，采用100、150、200、250、300Gy的⁶⁰Coγ射線分別對應五組要輻照處理的種子進行急性輻射，以無輻射處理為對照，劑量率為10Gy/min；

(4)種子的播種：種子播種于育苗床上；育苗床基質為體積比6∶4的泥炭和谷殼的混合物，基質裝盆前用高壓滅菌鍋進行消毒，育苗基質含有有機質30～45g·kg^-1，堿解氮100～130mg·kg^-1，速效磷80～95mg·kg^-1，速效鉀200～230mg·kg^-1，pH6.0～7.5；苗床底部鋪8～10cm厚的卵石、再鋪4～6cm厚的沙子，上層鋪25～30cm厚育苗基質；將處理和對照的種子均勻播種于苗床上，行株距10×10cm；播種后注意苗床基質相對濕度保持60～70％；

(5)苗木的管理：播種后14～15天發芽，當小苗長至5～6葉時定植于大棚設施中；畦寬2.5m，定植前挖定植溝，定植溝內加疏松且已經消毒的土壤，株距0.5m，大棚內的溫度保持20～25℃，大棚內土壤相對濕度保持60～65％，空氣相對濕度保持65～75％，培育3～5年后植株開花結果；

(6)變異單株的篩選：在苗木生長期間，仔細觀測不同處理的生物學、植物學性狀，選擇與對照在抗性、植物學和生物學特性方面有明顯差異的單株；

(7)變異性狀的分子鑒別：選擇優良單株，采集該優良與對照的幼嫩葉片，利用ISSR或者SSR標記技術進行變異基因分析；

(8)優良單株的區域試驗和推廣：通過生物學、植物學性狀以及結果特性的觀測，結合分子鑒別，獲得優良單株；將該單株進行無性繁殖，選擇不同的區域進行試驗，以明確其適種范圍，并總結適合該單株的一整套栽培措施。

3.根據權利要求2所述的一種葡萄無性系品種的育種方法，其特征在于：所述步驟(4)中育苗基質含有有機質38g·kg^-1，堿解氮110mg·kg^-1，速效磷87mg·kg^-1，速效鉀237mg·kg^-1，pH6.3。

4.根據權利要求2所述的一種葡萄無性系品種的育種方法，其特征在于：所述步驟(4)中苗床底部鋪10cm厚的卵石、再鋪5cm厚的沙子，上層鋪25cm厚育苗基質。

5.根據權利要求2所述的一種葡萄無性系品種的育種方法，其特征在于：所述步驟(4)中播種后苗床基質相對濕度保持在60％。

6.根據權利要求2所述的一種葡萄無性系品種的育種方法，其特征在于：所述步驟(7)中利用ISSR或者SSR標記技術進行變異基因分析其葡萄ISSR-PCR的反應體系為：20μLPCR反應體積中，MgCl₂1.75mmol/L，dNTPs?0.20mmol/L，Taq聚合酶1.0U，引物0.2μmol/L，10×Buffer?2.0μL，ddH₂O?13.2μL。

7.根據權利要求6所述的一種葡萄無性系品種的育種方法，其特征在于：所述PCR反應的反應程序為：94℃預變性5min，94℃變性45s，50～60℃退火1min，72℃延伸1.5min，進行40個循環，最后72℃延伸7min。