[發明專利]產石杉堿甲的離體蛇足石杉葉狀體誘導和增殖的培養方法有效
申請號: | 201210005499.6 | 申請日: | 2012-01-10 |
公開(公告)號: | CN102550416A | 公開(公告)日: | 2012-07-11 |
發明(設計)人: | 涂藝聲;丁明華 | 申請(專利權)人: | 江西師范大學 |
主分類號: | A01H4/00 | 分類號: | A01H4/00 |
代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
地址: | 330000 *** | 國省代碼: | 江西;36 |
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摘要: | |||
搜索關鍵詞: | 產石杉堿甲 蛇足 葉狀 誘導 增殖 培養 方法 | ||
1.一種產石杉堿甲的離體蛇足石杉葉狀體誘導和增殖的培養方法,其特征在于:包括以下步驟:
(1.1)材料:蛇足石杉(Huperzia?serrata(Thunb.ex?Murray)Trev.,選擇健壯無病蟲害的廬山野生蛇足石杉植株,取當年抽生約3cm長的新枝;
(1.2)對外植體清洗消毒;
(1.3)外植體接種在葉狀體分化啟動培養基上培養至切口處出現綠色小凸點,繼續在葉狀體分化啟動培養基上培養10~15天,綠色小凸點發育成可辨的葉狀體組織,此時的葉狀體組織迅速增殖;葉狀體分化啟動培養基:1/2(6,7-V)+NAA?0.1~1.0mg/L,蔗糖用量20~30g/L;
(1.4)將誘導增殖的葉狀體組織分割成小塊,每瓶45ml左右培養基接種1.0g至1.5g,轉接到葉狀體繼代增殖培養基上培養,葉狀體繼代增殖培養基:6,7-V+NAA0.1~1.5mg/L或IAA0.1~1.0mg/L,蔗糖用量20~30g/L;
(1.5)葉狀體分割繼代;一小部分葉狀體切割作繼代小塊,接種到繼代增殖培養基上繼代培養,以后每40~50天轉代一次,每代葉狀體生物量鮮重比接種量增加8~13倍,建成葉狀體無性繁殖系;另一大部分葉狀體收獲可提取石杉堿甲。
2.根據權利要求1所述的產石杉堿甲的離體蛇足石杉葉狀體誘導和增殖的培養方法,其特征在于:培養條件如下:
(2.1)培養參數:恒溫24±2℃,相對濕度60%~70%,光照強度為1000~1500lx,日照時長11~14h/d;
(2.2)技術參數:外植體污染率低于10%~20%;葉狀體誘導率50%~80%;繼代周期40~50d,建立蛇足石杉原植物再生葉狀體組織的離體無性增殖系;每代葉狀體生物量鮮重比接種量增加8~13倍,離體培養的蛇足石杉葉狀體能生產積累石杉堿甲。
3.根據權利要求1所述的產石杉堿甲的離體蛇足石杉葉狀體誘導和增殖的培養方法,其特征在于:對外植體消毒過程中用自來水洗去枝葉上的灰塵后,再用洗衣粉液浸泡6~10min,然后用軟毛筆刷洗枝葉,自來水細流水中漂洗干凈,濾紙吸干水滴后裝入無菌容器;再以質量分數75%的乙醇和質量分數0.1%~0.5%HgCl2加1滴吐溫80先后分次消毒。
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