[發明專利]一種快速制備色譜分離制備丹酚酸B的方法

無效

• 申請號: 201210004340.2
• 申請日: 2012-01-06
• 公開（公告）號: CN102532077A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 徐新軍;謝春燕;謝鷙生;黃潔云;楊梅;王建;王大沖
• 申請（專利權）人: 中山大學;回音必集團（江西）東亞制藥有限公司
• 主分類號: C07D307/86
• 分類號: C07D307/86
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

技術領域

本發明涉及一種從丹參藥材中分離純化得到純度大于98.0％的丹酚酸B的制備方法。

技術背景

丹參為唇形科植物Salvia?miltiorrhiza?Bge.的干燥根及根莖，具有祛淤止痛、活血通經、清心除煩之功效。丹參主要含兩類有效成分：一為脂溶性的二萜類化合物，二為水溶性的多聚酚酸類成分。實驗研究證明，丹參水溶性成分具有多方面的藥理活性，具有很強的抗氧化活性。丹酚酸B為丹參中重要的水溶性有效成分之一，約占總酚酸的70％，在2010版中國藥典中，已將丹酚酸B作為丹參片的指標成分。丹酚酸B由三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成，研究表明其有強烈的抗氧化和清除氧自由基的活性，對腎功能不全和肝損傷均有一定保護作用。分離制備丹參水溶性活性成分對進一步揭示丹參藥效的物質基礎和開發新的天然藥物具有十分重要的意義。而丹酚酸B在水溶液中的穩定性與pH值、溫度有很大關系，給中藥制劑的生產和儲存帶來較大的困難。

目前丹酚酸B的分離純化方法主要有：(1)柱層析法，但操作比較復雜，效率不高，而且需要不同填料結合使用；(2)制備型高效液相色譜法，對設備和試劑要求高，成本較高，難以規模化生產；(3)高速逆流色譜法，需要進行大量實驗選擇合適的溶劑系統。

快速制備色譜是在傳統柱色譜的基礎上發展起來的快速分離系統，采用自動輸液系統和更小粒徑的填料，通過連接檢測器進行實時監測，并可自動收集餾分。該色譜儀可使用分析純試劑做流動相，降低了成本，可承受較高流速，通過調節流動相的比例實現對物質的快速、有效分離，并且重復性好。

丹酚酸B的結構式如下：

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種分離時間短、分離效果好、產品純度高(純度＞98.0％)的丹酚酸B分離制備方法。

本發明通過以下技術方案實現上述目的：

發明提供了一種快速制備色譜分離制備丹酚酸B的方法：丹參藥材先用含乙醇水溶液超聲提取，減壓濃縮，經有機溶劑萃取得到浸膏，以浸膏為原料，以快速制備色譜為分離手段，以甲醇-水為洗脫體系，具體步驟為：

(1)藥材處理：丹參藥材以1∶10～20的料液比(m/v)，用體積分數30％～80％的乙醇-水溶液，超聲提取0.5～2h，過濾，濾渣同法再提取1次，合并兩次的提取液，濾過，合并濾液，濾液60℃以下減壓濃縮至為原體積的1/2～1/4，過濾，濾液用乙醚萃取，乙醚用量與濃縮液體積比為0.5～1，水層加酸調節pH為3～4，過濾獲得水層清液，水層清液以乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層減壓濃縮至干，得到乙酸乙酯浸膏；

(2)樣品處理：乙酸乙酯浸膏加體積分數10％～70％的甲醇-水溶解，得濃度為30～60mg·mL^-1的樣品溶液，離心，取上清，得到樣品溶液；

(3)色譜柱預處理：快速制備液相色譜選擇制備型中低壓液相色譜柱，以洗脫體系溶液平衡色譜柱；洗脫體系為甲醇-水溶液，其中甲醇在甲醇-水溶液中的體積濃度為25％～50％；

(4)進樣：將步驟(2)獲得的樣品溶液進樣，進樣體積為1～5mL；

(5)洗脫：采用洗脫體系溶液洗脫色譜柱，流速控制在3～5mL·min^-1，收集洗脫液；洗脫體系為甲醇-水溶液，其中甲醇在甲醇-水溶液中的體積分數為25％～50％；

(6)丹酚酸B的獲?。菏占南疵撘?加入氯化鈉固體至)飽和后，乙酸乙酯萃取，經減壓濃縮和干燥得到丹酚酸B固體。

優選步驟(1)所述的乙醚萃取次數為1～3次，優選3次，每次乙醚的用量與濃縮液的體積比為1∶0.5～1，優選等體積；水層采用0.1～1mol·L^-1鹽酸溶液調pH為3～4；乙酸乙酯萃取次數為1～3次，優選3次，每次乙酸乙酯的用量與水層清液體積比為1∶0.5～1，優選等體積。

其中，步驟(3)是以5～10倍柱體積的洗脫體系溶液平衡色譜柱。所采用的制備型中低壓色譜柱可以為商品化或手工填充的中低壓色譜柱，填料為C₁₈鍵合相填料；色譜柱填料平均粒徑為30～60μm。

優選步驟(5)的洗脫過程采用在線紫外檢測，自動收集洗脫液，紫外檢測波長為254nm和286nm。

步驟(6)所得洗脫液用氯化鈉飽和，所述乙酸乙酯萃取，次數優選為3次，合并乙酸乙酯層，經減壓濃縮和真空干燥丹酚酸B；減壓濃縮和真空干燥的溫度為30℃～60℃，優選30℃～35℃。

可以采用以下優選方案進行制備：